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技術(shù)文章
酵母雙雜交檢測(cè)(Yeast Two-Hybrid)產(chǎn)品專題

 酵母雙雜交檢測(cè)(Yeast Two-Hybrid Assay)產(chǎn)品專題 

 

檢測(cè)原理:

酵母雙雜交系統(tǒng)(Yeast two-hybrid assay)是用于體內(nèi)研究蛋白相互作用的一種非常便利的工具,常用的如GAL4為基礎(chǔ)的系統(tǒng),使用酵母轉(zhuǎn)錄因子GAL4來檢測(cè)轉(zhuǎn)錄激活后的蛋白相互作用。某些轉(zhuǎn)錄因子(如GAL4)由兩個(gè)可以分開,功能上相互獨(dú)立的結(jié)構(gòu)域組成,N端有一個(gè)147個(gè)氨基酸組成的DNA結(jié)合域(DNA binding domainBD),C端有一個(gè)由113個(gè)氨基酸組成的轉(zhuǎn)錄激活域(transcription activation domain,AD)。BD可以和上游激活序列(UAS)結(jié)合,而AD能激活UAS下游基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。單獨(dú)的BDAD不能激活基因轉(zhuǎn)錄,兩者只有通過某種方式結(jié)合在一起形成完整的轉(zhuǎn)錄激活因子的功能【見圖1。酵母雙雜交系統(tǒng)主要利用酵母GAL4的這個(gè)特性通過兩個(gè)雜交蛋白在酵母細(xì)胞中的相互結(jié)合及對(duì)報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄激活來研究活細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的相互作用,對(duì)蛋白質(zhì)之間微弱、瞬間的作用都能通過報(bào)告基因敏感的檢測(cè)到。

 

酵母雙雜交系統(tǒng)應(yīng)用:

  1. 對(duì)新的與已經(jīng)蛋白相互作用的鑒定
  2. 對(duì)預(yù)測(cè)蛋白相互作用的確認(rèn)
  3. 對(duì)蛋白相互作用區(qū)域的鑒定

 

1. 雙雜交檢測(cè)原理圖。兩個(gè)蛋白分別表達(dá),一個(gè)(誘餌蛋白bait protein)融合到Gal4 DNA結(jié)合域表達(dá),另一個(gè)(誘捕蛋白prey protein)融合到Gal4轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(AD)表達(dá)。在Y2HGold酵母菌株中,只有當(dāng)兩個(gè)蛋白之間相互作用并結(jié)合到Gal4反應(yīng)性啟動(dòng)子上才能活化報(bào)告基因(AUR1-C, ADE2, HIS3, MEL1)的表達(dá)。

 

酵母雙雜交系統(tǒng)操作流程(以Clontech Matchmarker GAL4-based two hybrid assay為例)

完整的Matchmarker篩選過程包含以下步驟:

*步:執(zhí)行對(duì)照實(shí)驗(yàn);

第二步:誘餌載體的構(gòu)建及自我激活和毒性檢測(cè);

第三步:篩選Mate&Plate文庫

第四步:確認(rèn)和闡釋結(jié)果

3. 使用Mate&Plate文庫進(jìn)行雙雜交篩選。捕獲蛋白(bait protein)是酵母菌Y2HGold表達(dá)的Gal4 DNA-BD融合蛋白。高復(fù)雜性文庫表達(dá)Gal4 AD融合蛋白,由Y187酵母菌提供。當(dāng)兩種轉(zhuǎn)化菌株混合過夜能接合產(chǎn)生二倍體(Diploids)。此二倍體含有4個(gè)報(bào)告基因:HIS3ADE2,MEL1AUR1-C,受雙雜交作用而活化表達(dá)。

 

酵母雙雜交檢測(cè)需要產(chǎn)品信息:

我司(懋康生物)提供酵母雙雜交研究需要的一系列產(chǎn)品,從酵母菌株、酵母質(zhì)粒、酵母培養(yǎng)基到篩選標(biāo)志(抗生素),咨詢,,2971634497。

一、富集培養(yǎng)基(Rich Medium 酵母培養(yǎng))

貨號(hào)

名稱

規(guī)格

價(jià)格(元)

MS6301-350G

YPD Agar Medium YPD瓊脂培養(yǎng)基

350g

550

MS6302-250G

YPD Medium YPD液體培養(yǎng)基

250g

438

MS6303-350G

YPDA Agar Medium YPDA瓊脂培養(yǎng)基

350g

550

MS6304-250G

YPDA Medium YPDA液體培養(yǎng)基

250g

438

【補(bǔ)充描述】:

  1. YPD是用于大多數(shù)酵母菌生長(zhǎng)所需的酵母提取物、蛋白胨和葡萄糖優(yōu)化配比后組成的混合物;
  2. YPDA培養(yǎng)基是在YPD基礎(chǔ)上添加硫酸腺嘌呤,終濃度120 µg/ml

 

二、基本培養(yǎng)基(Minimal Medium 酵母培養(yǎng))

貨號(hào)

名稱

規(guī)格

價(jià)格(元)

MS6311-467G

Minimal SD Agar Base SD瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基

467g

1428

MS6312-267G

Minimal SD Base SD基礎(chǔ)培養(yǎng)基

267g

768

MS6313-270G

Minimal SD Agar Base Gal/Raf SD瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基(含半乳糖/棉子糖)

270g

1428

MS6314-185G

Minimal SD Base Gal/Raf SD基礎(chǔ)培養(yǎng)基(含半乳糖/棉子糖)

185g

988

【補(bǔ)充描述】:

  1. SD Medium:酵母菌用的基本的合成限定培養(yǎng)基(Minimal synthetically defined medium),包含氮源,碳源(葡萄糖,除非有特殊說明)和DO添加劑(Dropout Supplement)。
  2. DODropout Supplement or Solution):特定氨基酸和核苷的混合物,添加到SD base內(nèi)以配制SD Medium。DO缺少一種或者更多未轉(zhuǎn)化酵母菌需要的營(yíng)養(yǎng)成分使其在SD Medium上生長(zhǎng),作為營(yíng)養(yǎng)篩選標(biāo)志。

 

三、省卻成分氨基酸混合物(DO Supplements 酵母培養(yǎng))

類型

名稱

貨號(hào)

規(guī)格

價(jià)格(元)

Single Dropout Supplements (SDO)

單一省卻成分添加劑

DO Supplement -His

MS6316-10G

10g

418

DO Supplement -Leu

MS6317-10G

10g

418

DO Supplement -Trp

MS6318-10G

10g

418

DO Supplement -Ura

MS6319-10G

10g

418

Double Dropout Supplements (DDO)

雙省卻成分添加劑

DO Supplement -His/-Leu

MS6320-10G

10g

418

DO Supplement -His/-Ura

MS6321-10G

10g

418

DO Supplement -Leu/-Trp

MS6322-10G

10g

418

DO Supplement -Met/-Trp

MS6323-10G

10g

418

DO Supplement -Trp/-Ura

MS6324-10G

10g

418

DO Supplement -Trp/-His

MS6325-10G

10g

418

DO Supplement -Ura/-Leu

MS6326-10G

10g

418

Triple Dropout Supplements (TDO)

三省卻成分添加劑

DO Supplement -His/-Leu/-Trp

MS6331-10G

10g

418

DO Supplement -His/-Leu/-Ura

MS6332-10G

10g

418

DO Supplement -His/-Trp/-Ura

MS6333-10G

10g

418

DO Supplement -Leu/-Met/-Trp

MS6334-10G

10g

418

DO Supplement -Leu/-Trp/-Ura

MS6335-10G

10g

418

Quadruple Dropout Supplements (QDO)

四省卻成分添加劑

DO Supplement -Ade/-His/-Leu/-Trp

MS6341-10G

10g

418

DO Supplement -His/-Leu/-Met/-Trp

MS6342-10G

10g

418

DO Supplement -His/-Leu/-Trp/-Ura

MS6343-10G

10g

418

 

四、篩選抗生素(底物)

貨號(hào)

名稱

規(guī)格

價(jià)格(元)

MS0002-1ML

Aureobasidin A AbA)金擔(dān)子素A1 mg/ml

1ml

900

MF2003-25MG

X-α-Gal 5--4--3-吲哚-α-D-吡喃半乳糖苷

25mg

285

MF2001-1G

X-Gal 5--4--3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷

1g

280

【補(bǔ)充描述】:

1Aureobasidin A AbA)金擔(dān)子素A是報(bào)告基因AUR1-C的篩選抗生素,以判斷酵母菌是否能表達(dá)賦予其AbA抗性的酶。

2X-α-Galα-半乳糖苷酶(由MEL1基因編碼)的底物,當(dāng)雙雜交發(fā)生時(shí)MEL1報(bào)告基因正常表達(dá)催化底物發(fā)生顏色反應(yīng),使得酵母菌落呈藍(lán)色。

3X-Galß-半乳糖苷酶(由lacz基因編碼)的底物。

 

五、酵母質(zhì)粒提取試劑盒

貨號(hào)

名稱

規(guī)格

價(jià)格(元)

D3376-01

酵母質(zhì)粒抽提試劑盒 Yeast Plasmid KitOmega Biotek

50

495

【試劑盒工作原理】:

該試劑盒把硅膠柱純化技術(shù)同經(jīng)典的SDS堿裂解法結(jié)合起來,用戶可在1小時(shí)內(nèi)從酵母培養(yǎng)液中純化出高純度的質(zhì)粒DNA。純化過程不需用任何到有害的有機(jī)物抽提,亦不需用到耗時(shí)的乙醇沉淀。質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量依賴于酵母攜帶質(zhì)粒的拷貝數(shù),酵母菌株以及生長(zhǎng)條件。 一般來說,酵母質(zhì)粒的拷貝數(shù)較低,5.0ml過夜培養(yǎng)液中質(zhì)粒DNA產(chǎn)量約為1.0 µg左右。純化的質(zhì)??芍苯佑糜诿盖?,PCR,電轉(zhuǎn)化等應(yīng)用。酵母收集后,加入破壁酶和玻璃珠去除細(xì)胞壁,用傳統(tǒng)堿裂法裂解細(xì)胞,然后將獲得的上清液轉(zhuǎn)移至結(jié)合柱結(jié)合DNA,經(jīng)過兩次快速洗滌,zui后用無菌水洗脫出質(zhì)粒DNA。

 

六、酵母轉(zhuǎn)化試劑盒

貨號(hào)

名稱

規(guī)格

價(jià)格(元)

MF2501-200T

Yeast Transformation Kit 酵母轉(zhuǎn)化試劑盒

200T

768

【補(bǔ)充描述】:

酵母質(zhì)粒轉(zhuǎn)化試劑盒,含PEG/liAC酵母轉(zhuǎn)化需要的所有試劑,操作簡(jiǎn)單,轉(zhuǎn)化效率高。

 

七、酵母雙雜交菌和感受態(tài)細(xì)胞

貨號(hào)

名稱

規(guī)格

價(jià)格(元)

MF2351-300UL

Y2HGold Yeast Strain 酵母雙雜交用甘油菌

300μl

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MF2352-100UL

Y2HGold Chemically Competent Cell  酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

100μl

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MF2353-300UL

Y187 Yeast Strain  酵母雙雜交用甘油菌

300μl

咨詢

MF2354-100UL

Y187 Chemically Competent Cell  酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

100μl

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八、酵母菌載體

貨號(hào)

名稱

規(guī)格

價(jià)格(元)

MF3601-20UL

pGBKT7 DNA-BD Vector 酵母雙雜交克隆載體

20μl

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MF3602-20UL

pGBKT7-53 Vector 酵母雙雜交對(duì)照載體

20μl

咨詢

MF3603-20UL

pGBKT7-Lam Vector  酵母雙雜交對(duì)照載體

20μl

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MF3604-20UL

pGADT7-AD Vector 酵母雙雜交克隆載體

20μl

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MF3605-20UL

pGADT7-T Vector 酵母雙雜交對(duì)照載體

20μl

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MF3606-20UL

pBridge Vector 酵母三雜交克隆載體

20μl

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MF3609-20UL

pGBT9 Vector 酵母雙雜交克隆載體

20μl

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

 

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品與實(shí)驗(yàn)服務(wù)工作,主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承以人為本,以誠為信、合同守信的經(jīng)營(yíng)理念。堅(jiān)持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供產(chǎn)品。

 

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