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Reactive Oxygen Species (ROS) Assay Kit

Reactive Oxygen Species (ROS) Assay Kit

簡要描述:

MX4801 Reactive Oxygen Species (ROS) Assay Kit 活性氧(ROS)檢測試劑盒:活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產(chǎn)物過氧化物和羥化物等,參與細胞生長增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程。

產(chǎn)品時間:2024-03-21

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Reactive Oxygen Species (ROS) Assay Kit

活性氧(ROS)檢測試劑盒

 


搜索關(guān)鍵詞:

Reactive Oxygen Species,ROS 活性氧;DCFH-DA;JC-1線粒體模電位探針;JC-10;CAS NO:4091-99-0;

 

貨號產(chǎn)品名稱規(guī)格價格(元)

Reactive Oxygen Species (ROS) Assay Kit 活性氧(ROS)檢測試劑盒

MX4801-1KIT100~500T328

 

研究意義:

活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產(chǎn)物過氧化物和羥化物等,參與細胞生長增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程。


產(chǎn)品描述:

活性氧檢測試劑盒(Reactive Oxygen Species Assay Kit,或ROS Assay Kit)是一種利用熒光染料DCFH-DA(2,7-Dichlorodihydrofluorescein diacetate)進行細胞內(nèi)活性氧水平檢測的常用方法。檢測原理在于DCFH-DA本身無熒光,能自由穿過細胞膜,一旦進入細胞后,被胞內(nèi)的酯酶水解生成無熒光的DCFH。DCFH不能穿透細胞膜,從而保留在胞內(nèi)。此時胞內(nèi)的活性氧可以氧化DCFH生成有熒光的DCF。通過DCF熒光的強弱即可反映活性氧的水平。
 

本試劑盒包含活性氧陽性對照Rosup,利于活性氧的檢測。Rosup是一種混合物,濃度為50mg/ml。

因檢測對象和反應(yīng)體系的不同,本試劑盒可檢測100-500個樣品。
 

產(chǎn)品組成:

組分編號組分名稱規(guī)格儲存方法
MX4801-A活性氧探針DCFH-DA (10mM)0.1ml-20℃避光保存
MX4801-B活性氧陽性對照(Rosup, 50mg/ml)1ml-20℃保存
——產(chǎn)品說明書

1份

 

保存與運輸方法:

保存:-20ºC保存,有效期一年。

運輸:冰袋運輸。

 

使用方法
1.   裝載探針

【注意】:對于刺激時間較短(通常2h以內(nèi))的細胞,先裝載探針,后用活性氧陽性對照Rosup和/或待研究藥物刺激細胞;對于刺激時間較長(通常6h以上)的細胞,先用活性氧陽性對照Rosup或待研究藥物刺激細胞,后裝載探針。

1.1  原位裝載探針(僅適用于貼壁細胞)
a)檢測前一天進行細胞鋪板,確?;钚匝鯔z測當(dāng)天細胞匯合率達到50~70%。
b) 吸出細胞培養(yǎng)液,加入適量體積以及濃度的待研究藥物,于37ºC細胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育,具體誘導(dǎo)時間根據(jù)細胞類型和藥物自身特性決定。
【可選】陽性對照Rosup先用無血清培養(yǎng)液按照1:1000比例稀釋陽性對照,通常 37℃培養(yǎng)箱內(nèi)刺激20~30min可以觀察到顯著的活性氧水平提高,但依細胞類型會有比較明顯差異【刺激時間可參考文獻或?qū)嶒灲?jīng)驗來調(diào)整】。如果刺激后30min內(nèi)未觀察到活性氧水平升高,可以適當(dāng)提高Rosup的工作濃度;反之,如果活性氧升高過快,則適當(dāng)降低Rosup的工作濃度。
c)按照1:1000用無血清培養(yǎng)液稀釋DCFH-DA (10mM),使其終濃度為10μM.。吸出細胞培養(yǎng)液,加入適當(dāng)體積DCFH-DA工作液。
【注意】:加入體積以能充分蓋住細胞為宜。對于6孔板,每個孔加入DCFH-DA工作液不少于1ml。對于96孔板,每個孔加入DCFH-DA工作液不少于0.1ml。

d)37ºC細胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育20min。
e) 用無血清細胞培養(yǎng)液洗滌細胞三次,以充分去除未進入細胞內(nèi)的DCFH-DA。
 

1.2       收集細胞后裝載探針
1)按照常規(guī)方法,清洗并收集足量的細胞。【注意】:保證細胞的狀態(tài)健康。
2)用適量體積以及濃度的待研究藥物重新懸浮細胞,于37ºC細胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育,具體誘導(dǎo)時間根據(jù)細胞類型和藥物自身特性決定。

【可選】陽性對照Rosup先用無血清培養(yǎng)液按照1:1000比例稀釋陽性對照,通常 37℃培養(yǎng)箱內(nèi)刺激20~30min可以觀察到顯著的活性氧水平提高,但依細胞類型會有比較明顯差異【刺激時間可參考文獻或?qū)嶒灲?jīng)驗來調(diào)整】。如果刺激后30min內(nèi)未觀察到活性氧水平升高,可以適當(dāng)提高Rosup的工作濃度;反之,如果活性氧升高過快,則適當(dāng)降低Rosup的工作濃度。
3)  探針裝載前,按照1:1000用無血清培養(yǎng)液稀釋DCFH-DA (10mM),使其終濃度為10μM.。
4)  離心,吸出細胞內(nèi)刺激藥物,之后用適量DCFH-DA工作液重懸細胞,使得細胞密度為1×106~2×107/ml。
【注意】:細胞密度需根據(jù)后續(xù)檢測體系,檢測方法,以及檢測總量來調(diào)整。例如,對于流式分析,單管檢測內(nèi)細胞數(shù)目控制在104~ 106之間。

5) 37ºC細胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育20min。每隔3~5min顛倒混勻一下,使探針和細胞充分接觸。
6)  用無血清細胞培養(yǎng)液洗滌細胞三次,以充分去除未進入細胞內(nèi)的DCFH-DA。

2.   檢測
2.1    原位裝載法
2.2    收集細胞后裝載法

 
3.   參數(shù)設(shè)置
4.   其他說明


注意事項

1) 探針裝載后,一定要洗凈殘余的未進入細胞內(nèi)的探針,否則會導(dǎo)致背景較高。

2) 探針裝載完畢并洗凈殘余探針后,可以進行激發(fā)波長的掃描和發(fā)射波長的掃描,以確認(rèn)探針的裝載情況是否良好。

3) 盡量縮短探針裝載后到測定所用的時間(刺激時間除外),以減少各種可能的誤差。

4) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


 — —  Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】


上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務(wù)工作,主要從事細胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承以人為本,以誠為信、合同守信的經(jīng)營理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。


MX4801 Reactive Oxygen Species (ROS) Assay Kit  活性氧(ROS)檢測試劑盒

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