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產(chǎn)品中心
Hygromycin B 潮霉素B 抗生素

Hygromycin B 潮霉素B 抗生素

簡要描述:

Hygromycin B 潮霉素B 抗生素:潮霉素B(Hygromycin B),從吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)分離到的一種氨基糖苷類抗生素。通過與30S核糖體亞基結(jié)合,誘導(dǎo)對mRNA模板的錯(cuò)讀且抑制易位,從而以阻止蛋白合成。潮霉素B能殺死細(xì)菌、真菌和高等真核細(xì)胞。主要用來篩選和維持培養(yǎng)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Hph載體的原核細(xì)胞或真核細(xì)胞(植物細(xì)胞和哺乳動物細(xì)胞)。

產(chǎn)品時(shí)間:2024-03-21

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 Hygromycin B 潮霉素B


 

產(chǎn)品標(biāo)簽

Hygromycin B潮霉素B;50mg/ml;Hph 潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶;遺傳霉素G418;Blasticidin S 殺稻瘟菌素(滅瘟散);Zeocin博萊霉素;CAS:31282-04-9


 

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱產(chǎn)品編號規(guī)格價(jià)格(元)

Hygromycin B 潮霉素B(凍干粉)

MS0003-1G1g600

Hygromycin B 潮霉素B(凍干粉)

MS0003-5G5g2400

Hygromycin B 潮霉素B(凍干粉)

MS0003-10G10g3840

Hygromycin B (50 mg/ml) 潮霉素B(50 mg/ml)

MS0003-20ML20ml820


 

產(chǎn)品描述
潮霉素B(Hygromycin B),從吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)分離到的一種氨基糖苷類抗生素。通過與30S核糖體亞基結(jié)合,誘導(dǎo)對mRNA模板的錯(cuò)讀且抑制易位,從而以阻止蛋白合成。潮霉素B能殺死細(xì)菌、真菌和高等真核細(xì)胞。主要用來篩選和維持培養(yǎng)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Hph載體的原核細(xì)胞或真核細(xì)胞(植物細(xì)胞和哺乳動物細(xì)胞)。
 

對潮霉素B(Hygromycin B)的抗性來源于大腸桿菌潮霉素抗性基因(hph或hyg),該基因能編碼潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶(hygromycin phosphotransferase),使得潮霉素B發(fā)生磷酸化從而失去活性。目前Hph抗性基因主要有兩種來源,zui初來源是大腸桿菌(Escherichia coli),另一來源是潮霉素B產(chǎn)生菌吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)。如今,攜帶Hph抗性的載體大多來自大腸桿菌。

我司提供兩種產(chǎn)品形式的潮霉素B。
 

一種以凍干粉形式提供,貨號分別為:MS0003-1G,MS0003-5G,MS0003-10G。需要配制成儲存液后備用。

一種以溶于PBS的無菌液體形式提供,貨號為MS0003-20ML,使用更簡單方便。
 

 

產(chǎn)品特性
1)   化學(xué)名:O-6-Amino-6-deoxy-L-glycero-D-galacto-heptopyranosylidene-(1-2-3)-O-β-D-talopyranosyl(1-5)- 2-deoxy-N3-methyl-D-streptamine
2)   同義名:Hygromycin B, from Streptomyces hygroscopicus 潮霉素質(zhì)B,來源于吸水鏈霉菌

3)   CAS NO:31282-04-9

4)   分子式:C20H37N3O13

5)   分子量:527.53 g/mol

6)   外觀:類白色至白色粉末

7)   純度:≥90%(HPLC)

8)   效價(jià):≥1050 U/mg

9)化學(xué)結(jié)構(gòu):


 

保存與運(yùn)輸方法

保存:粉末-20℃干燥保存,2年有效。溶液2-8°C避光保存,1年有效。

運(yùn)輸:冰袋運(yùn)輸。


使用方法
1、   儲存液制備

1)潮霉素B(粉末形式):稱取適量粉末溶于1×PBS配制成50mg/ml溶液,用0.22μm濾膜過濾除菌,置于2-8°C避光保存。

2)潮霉素B(溶液形式):已是無菌儲存液,直接用細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋到工作濃度即可使用。

2、   建議工作濃度

潮霉素B用來篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細(xì)胞代謝率而變化。1) 哺乳動物細(xì)胞 使用濃度為50-1000 μg/ml,常用篩選濃度為200 μg/ml,zuijia濃度需要?dú)缜€來確定2) 植物細(xì)胞 常用濃度:20-200 μg/ml;
3)   細(xì)菌常用濃度:20-200 μg/ml;
4)   真菌 常用濃度:200-1000 μg/ml;
 

3、殺滅曲線的建立

建議初次實(shí)驗(yàn)一定要建立殺滅曲線(kill curve),至少設(shè)立5個(gè)濃度,篩選到適合自身實(shí)驗(yàn)體系的zuijia濃度。
1)   將未轉(zhuǎn)化細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,鋪?zhàn)銐虻目滓员WC后續(xù)的梯度實(shí)驗(yàn)。37℃培養(yǎng)過夜;【注意】:對于需要更高密度以保證活力的細(xì)胞,增加接種量。
 

2)   第二日,用含梯度濃度潮霉素B的培養(yǎng)基替換舊培養(yǎng)基。比如,哺乳動物細(xì)胞常用濃度為50-1000μg/ml,可設(shè)50, 100, 250, 500, 750, 1000μg/m這6個(gè)濃度,各3個(gè)平行。同時(shí)設(shè)置一陰性對照,3個(gè)平行。
3)   接下來每3-4日更換新鮮的含抗生素培養(yǎng)基。
4)   按照固定周期(如每2天)進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)化細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的zui低濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選所需的工作濃度。
 

4穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞的篩選
1)   轉(zhuǎn)染48h后,用含zuijia篩選濃度潮霉素B的培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)胞傳代。【注意】:細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷效果。當(dāng)細(xì)胞密度過高,篩選效率會降低。為了得到較好的篩選效果,建議將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%。
2)   每3-4日更換新鮮的含抗生素培養(yǎng)基。
3)   篩選7天后觀察并評估細(xì)胞集落的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間,這些取決于宿主細(xì)胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。
4)   挑取5-10個(gè)抗性克隆到35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5)   之后換用正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
 

注意事項(xiàng)

為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
 

 

 — — Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

 

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品與實(shí)驗(yàn)服務(wù)工作,主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承以人為本,以誠為信、合同守信的經(jīng)營理念。堅(jiān)持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。

 

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