酵母感受態(tài)細胞 克隆與表達分析
簡要描述：
Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母感受態(tài)細胞 克隆與表達分析，是GAL4系統(tǒng)酵母雙雜交用實驗菌株，能直接轉化質?；蚺cMATα型酵母菌株Y187通過接合（mating）操作進行蛋白相互作用驗證或雙雜交文庫篩選和構建。
產(chǎn)品時間：2024-03-21
打印當前頁Y2HGold Chemically Competent Cell
酵母菌化學感受態(tài)細胞
產(chǎn)品標簽
Matchmarker GAL4雙雜交系統(tǒng)；Y2HGold；pGBKT7；Y187；pGADT7；AUR1-C；Aureobasidin A （AbA）；金擔子素；
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化學感受態(tài)細胞 | MF2352-1000UL | 10×100μl | 290 |
MF2352-5000UL | 50×100μl | 1320 |
產(chǎn)品包裝
組分編號 | 組分名稱 | 保存 | 貨號（規(guī)格） | |
MF2352-1000UL | MF2352-5000UL | |||
MF2352-A | Y2HGold Competent Cell | -80℃ | 10×100μl | 50×100μl |
MF2352-B | pGADT7 Control Vector (10ng/μl) | -80℃ | 10μl | 10μl |
MF2352-C | Carrier DNA (5μg/μl) | -20℃ | 100μl | 500μl |
MF2352-D | PEG/LiAC Solution | +4℃ | 5ml | 25ml |
產(chǎn)品描述
Y2HGold是GAL4系統(tǒng)酵母雙雜交用實驗菌株，能直接轉化質?；蚺cMATα型酵母菌株Y187通過接合（mating）操作進行蛋白相互作用驗證或雙雜交文庫篩選和構建。Y2HGold-GAL4酵母雙雜交系統(tǒng)需要兩種質粒配套使用，分別為pGBKT7和pGADT7。前者篩選標志為Trp1，用于表達DNA-BD與誘餌蛋白（bait）的融合蛋白；后者篩選標志為Leu，用于表達AD與誘捕蛋白（prey）的融合蛋白。Y2HGold有四個報告基因：AUR1-C，HIS3, ADE2, MEL1，分別由三個*異源的Gal4反應啟動元件-G1，G2，M1操控，這三種啟動子只有GAL4識別的17bp核心區(qū)相同，其余部分都不同，因此大大降低了酵母雙雜交假陽性發(fā)生的概率。此外，新報告基因AUR1-C與以往的營養(yǎng)缺陷報告基因相比，具有更低背景，這一優(yōu)勢也可降低酵母雙雜交假陽性發(fā)生的概率。
本品為經(jīng)特殊工藝制備的Y2HGold酵母菌化學感受態(tài)細胞，用pGADT7質粒檢測轉化效率＞104cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存三個月。
基因型
MATa, trp1-901, leu2-3, 112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ, LYS2::GAL1UAS-Gal1TATA-His3, GAL2UAS- Gal2TATA-Ade2 URA3::MEL1UAS-Mel1TATA AUR1-C MEL1
注意事項
1. 在冰上融化感受態(tài)細胞。
2. 轉化高濃度質粒可相應減少用于涂板的菌量。同時轉化2-3種質粒可適當增加質粒的用量。
3. Y2HGold對高溫敏感，zui適生長溫度為27-30℃，一旦高于31℃，生長速度和轉化率都呈指數(shù)下降。
4.菌落變粉紅色并不是污染，而是酵母細胞生長中的一種常見現(xiàn)象。當酵母細胞在平板上培養(yǎng)幾天，將平板內(nèi)的腺嘌呤消耗殆盡，那時酵母試圖通過自身代謝途徑合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破壞，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7基因均正常。由此，造成中間產(chǎn)物P-ribosylamino imidazole（AIR）在細胞的積累使得菌落變?yōu)榉奂t色。
5. 酵母菌在缺陷培養(yǎng)基上生長速度比YPDA培養(yǎng)基慢，營養(yǎng)缺陷成分越多，生長越慢，以轉化涂板為例：涂YPDA平板于29℃，48h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆；涂SD單缺平板于29℃，48-60h培養(yǎng)可見直徑1mm克??；涂SD雙缺平板于29℃，60-80h培養(yǎng)可見直徑1mm克??；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培養(yǎng)可見直徑1mm克??；
6. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
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— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經(jīng)營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質產(chǎn)品。
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