Y187 Chemically Competent Cell

酵母菌化學(xué)感受態(tài)細胞

產(chǎn)品標(biāo)簽

Matchmarker GAL4雙雜交系統(tǒng)；Y2HGold；pGBKT7；Y187；pGADT7；AUR1-C；Aureobasidin A （AbA）；金擔(dān)子素；

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品包裝

產(chǎn)品描述

Y187是GAL4系統(tǒng)酵母單雜交/雙雜交用實驗菌株，MATα型，能直接轉(zhuǎn)化質(zhì)?；蚺cMATa型酵母菌株（如Y2HGold，AH109等）通過接合（mating）操作進行蛋白相互作用驗證或雙雜交文庫篩選和構(gòu)建。Y187-GAL4酵母雙雜交系統(tǒng)需要兩種質(zhì)粒配套使用，分別為pGBKT7和pGADT7。前者篩選標(biāo)志為Trp1，用于表達DNA-BD與誘餌蛋白（bait）的融合蛋白；后者篩選標(biāo)志為Leu，用于表達AD與誘捕蛋白（prey）的融合蛋白。Y187有兩個報告基因：lacZ，MEL1，分別由兩種*異源的Gal4反應(yīng)啟動元件-G1，M1操控，這兩種啟動子只有GAL4識別的17bp核心區(qū)相同，其余部分都不同，因此大大降低了酵母雙雜交假陽性發(fā)生的概率。

本品為經(jīng)特殊工藝制備的Y187酵母菌化學(xué)感受態(tài)細胞，用pGADT7質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率＞10⁴cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存三個月。

基因型

MATα, ura3-52, his3-200, ade 2-101, trp 1-901, leu 2-3, 112, gal4Δ, met-, gal80Δ, URA3:: GAL1_UAS^-Gal1_TATA^-- lacZ, MEL1

注意事項

1.在冰上融化感受態(tài)細胞。

2.轉(zhuǎn)化高濃度質(zhì)?？上鄳?yīng)減少用于涂板的菌量。同時轉(zhuǎn)化2-3種質(zhì)?？蛇m當(dāng)增加質(zhì)粒的用量。

3.Y187對高溫敏感，zui適生長溫度為27-30℃，一旦高于31℃，生長速度和轉(zhuǎn)化率都呈指數(shù)下降。

4.菌落變粉紅色并不是污染，而是酵母細胞生長中的一種常見現(xiàn)象。當(dāng)酵母細胞在平板上培養(yǎng)幾天，將平板內(nèi)的腺嘌呤消耗殆盡，那時酵母試圖通過自身代謝途徑合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破壞，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7基因均正常。由此，造成中間產(chǎn)物P-ribosylamino imidazole（AIR）在細胞的積累使得菌落變?yōu)榉奂t色。

5.酵母菌在缺陷培養(yǎng)基上生長速度比YPDA培養(yǎng)基慢，營養(yǎng)缺陷成分越多，生長越慢，以轉(zhuǎn)化涂板為例：涂YPDA平板于29℃，48h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆；涂SD單缺平板于29℃，48-60h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆；涂SD雙缺平板于29℃，60-80h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培養(yǎng)可見直徑1mm克?。?/span>

6.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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Y187 Chemically Competent Cell 酵母感受態(tài)細胞 克隆與表達分析

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