SURE化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞（熱激法）
簡要描述：
SURE化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞（熱激法）：SURE菌株是Agilent （Stratagene）公司開發(fā)，特別設(shè)計用于克隆在傳統(tǒng)的大腸桿菌菌株中“無法克隆"的某些DNA段。本品是懋康生物就SURE菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率＞5×108 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品時間：2024-03-21
打印當(dāng)前頁SURE Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品標(biāo)簽：
SURE；SURE-2；Stbl3；Stable；Direct repeats 正向重復(fù)片段；Retroviral sequences 逆轉(zhuǎn)錄病毒序列；Stratagene;
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價格（元） |
MF2326-1000UL | SURE Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×100μl | 410 |
MF2326-5000UL | SURE Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 50×100μl | 1730 |
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產(chǎn)品組分：
組分編號 | 組分名稱 | 貨號（規(guī)格） | |
MF2316-1000UL | MF2316-5000UL | ||
MF2326-A | SURE Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
MF2326-B | Control Vector puC19, 10 pg/µl | 10μl | 10μl |
菌株描述
SURE菌株是Agilent (Stratagene)公司開發(fā)，特別設(shè)計用于克隆在傳統(tǒng)的大腸桿菌菌株中“無法克隆”的某些DNA段。SURE菌株破壞了重組酶系統(tǒng)整條通路上的組分，這些組分能催化重組和刪除體內(nèi)的非標(biāo)準(zhǔn)二級和三級結(jié)構(gòu)，包括十字形（由反向重復(fù)序列引起）和Z字形的DNA，經(jīng)常出現(xiàn)在真核生物DNA中，能阻止真核DNA克隆進(jìn)入傳統(tǒng)大腸桿菌菌株中。SURE含限制缺陷（McrA-, McrCB-, McrF-, Mrr-, HsdR-），使其無法對外源DNA進(jìn)行標(biāo)記和限制，從而提高外源甲基化DNA的克隆效率。也含內(nèi)切酶缺陷（endA），和重組缺陷（recB recJ），提高了外源DNA的穩(wěn)定性。存在于F´因子上的lacIq ZΔM15使菌株適用于藍(lán)白斑。菌株本身含卡那霉素（KanR）和四環(huán)素（TetR）特性。
SURE菌株基因型：e14-(McrA-) Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171 endA1 gyrA96 thi-1 supE44 relA1 lac recB recJ sbcC umuC::Tn5 (Kanr) uvrC [F´ proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr)].
產(chǎn)品描述
本品是SURE菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率＞5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。
注意事項(xiàng)
1） 感受態(tài)細(xì)胞必須用干冰運(yùn)輸。感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)在-80℃保存，不可反復(fù)凍融且放置時間過長，否則會減低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2） zui號在冰上融化感受態(tài)細(xì)胞。
3） 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時，需在相應(yīng)溫度及無菌條件下進(jìn)行。
4） 轉(zhuǎn)化高濃度質(zhì)粒或高效率連接產(chǎn)物可相應(yīng)降低zui終用于涂板的菌量。
5） 菌株本身含卡那霉素和四環(huán)素特性，攜帶此兩種抗性的質(zhì)粒不適合克隆到SURE細(xì)胞。當(dāng)攜帶抗霉素抗性基因（CamR）的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化進(jìn)入SURE細(xì)胞，使用添加100μg/ml氯霉素的LB固體平板來篩選克隆子。SURE細(xì)胞本身能耐受＜40μg/ml氯霉素，但對100μg/ml 氯霉素很敏感。
6） 為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可保留部分連接反應(yīng)液以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到zui低。
7） 采用常規(guī)操作流程轉(zhuǎn)化SURE感受態(tài)細(xì)胞，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)5×108 cfu/μg DNA。若是對轉(zhuǎn)化效率要求更高，可使用標(biāo)準(zhǔn)操作流程。
8） 產(chǎn)品包裝內(nèi)含質(zhì)粒pUC19 DNA(10 pg/μl)，供對照實(shí)驗(yàn)用。
9） 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
常規(guī)操作流程【所有操作均在無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)下進(jìn)行】
標(biāo)準(zhǔn)操作流程【所有操作均在無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)下進(jìn)行】
1） 冰上提前預(yù)冷14ml BD Falcon聚丙烯圓底離心管， 42℃預(yù)熱SOC培養(yǎng)基。
2） 從-80℃取出感受態(tài)細(xì)胞迅速置于冰浴中5min使其*融化。用手輕彈混勻吸取100 μl細(xì)胞到預(yù)冷的14ml離心管內(nèi)。
3） 加1.7μl β-ME（1.42M）到細(xì)胞內(nèi)。【β-ME能提高轉(zhuǎn)化效率】
4） 輕彈管子。置于冰上孵育10min，每2min輕彈混勻細(xì)胞一次。
5） 往細(xì)胞內(nèi)加入0.1-50ng目的DNA，輕彈混勻細(xì)胞，冰上靜置孵育30min。
6） 42℃熱激45s，熱激過程的持續(xù)性非常重要。冰上靜置2min，此過程不要搖動離心管。
1） 向每個離心管中加入900 μl預(yù)熱的無菌SOC培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，225-250 rpm振蕩培養(yǎng)60min，目的使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。
2） 吸取≤200 µl 轉(zhuǎn)化菌液，加到含相應(yīng)抗生素的LB固體瓊脂培養(yǎng)基上（若需要顏色反應(yīng)，平板含IPTG+ X-gal），用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃過夜培養(yǎng)?！?strong>注意：若是進(jìn)行藍(lán)白斑篩選，37℃至少培養(yǎng)17h，使得顏色能生成。另外將平板置于4℃孵育2h，能加強(qiáng)顏色反應(yīng)?！?/span>
附表1 固體和液體LB培養(yǎng)基配方
附表2 固體和液體2-YT培養(yǎng)基配方
— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品與實(shí)驗(yàn)服務(wù)工作，主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經(jīng)營理念。堅(jiān)持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
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