Coelenterazine Native 天然腔腸素

產(chǎn)品關鍵詞：

Coelenterazine (CTZ) 天然腔腸素；海腎熒光素酶（Rluc）；分泌型膜錨定熒光素酶（Gluc）；螢火蟲熒光素酶（Fluc）；In vivo bioluminescence imaging 活體動物體內(nèi)成像技術；CAS NO：50909-86-9；

產(chǎn)品信息

【溫馨提示】：見我司懋康生物（maokangbio）提供的活體成像底物-腔腸素及衍生物產(chǎn)品專題。

產(chǎn)品描述

腔腸素（Coelenterazine）是在水生生物中發(fā)現(xiàn)的一種發(fā)光基團（luminophore），是許多熒光素酶的作用底物，包括海腎熒光素酶（Renilla reniformis luciferase, Rluc），分泌型膜錨定熒光素酶（Gaussia luciferase, Gluc）和藪枝蟲熒光素酶（Obelia luciferase），和發(fā)光蛋白包括水母發(fā)光蛋白（Aequorin）的構成之一。其作用原理是以腔腸素為底物的熒光素酶，在含分子氧的條件下，氧化腔腸素產(chǎn)生高能量的中間產(chǎn)物，在此過程發(fā)射藍色光，光波長在450~480nm【見圖1】。而甲蟲（或螢火蟲）熒光素/熒光素酶（FLuc）系統(tǒng)不同，其在含分子氧的條件下，還需要ATP和Mg²⁺的存在才能同時發(fā)光，光波長在550-570nm。正由于生物發(fā)光信號和底物的差異，RLuc常常與FLuc聯(lián)合用于多重轉錄報告基因研究，或用作Fluc系統(tǒng)內(nèi)螢火蟲熒光素酶轉染的內(nèi)參。腔腸素應用甚是廣泛，包括：1）活細胞或組織的鈣離子檢測；2）細胞或組織的超氧化物和過氧亞硝基陰離子（活性氧，ROS）化學發(fā)光檢測；3）基因報告基因檢測；4）動物活體檢測；5）ELISA和生物發(fā)光共振能量轉移（BRET）用于蛋白相互作用研究；6）藥物高通量篩選（HTS）；

圖1. 海腎熒光素酶（Rluc）催腔腸素發(fā)光的反應流程

天然腔腸素（Coelenterazine Native，CTZ-Native）是自然界中存在豐富的一種腔腸素，也是目前應用普遍的一種標準底物。不僅是脫輔基水母發(fā)光蛋白（APO）的底物，也是海腎熒光素酶（Rluc）和分泌型膜錨定熒光素酶（Gluc）等熒光素酶的作用底物。前者用于檢測鈣離子濃度，后者用作熒光素酶的報告基因檢測系統(tǒng)。還可用于生物共振能量轉移BRET，細胞或組織內(nèi)的超氧陰離子和過氧化亞硝基陰離子水平（ROS）的化學發(fā)光檢測等。

產(chǎn)品特性

1）   CAS NO：55779-48-1

2）   化學名：8-benzyl-6-(4-hydroxyphenyl)-2-[(4-hydroxyphenyl)methyl] -7H-imidazo [1,2-a]pyrazin-3-one

3）   同義名：Coelenterazine, nativ; native Coelenterazine; Coelenterazine free base; native-CTZ; 腔腸素游離酸；

4）   分子式：C₂₆H₂₁N₃O

5）   分子量：423.46 g/mol

6）   純度：>95%

7）   外觀：黃色至棕黃色結晶性粉末

8）   溶解性：溶于甲醇或乙醇，不要溶于DMSO

9）   化學結構式：

注意事項

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

操作步驟

一、  腔腸素工作液制備

【有關腔腸素溶解的注意事項】：

1）   腔腸素溶于甲醇或乙醇，不可溶于DMSO。腔腸素的水溶性相對比較低，一般情況需先將腔腸素溶于酸化的醇類溶劑配成相對高濃度的母液，然后再用水溶性緩沖液稀釋到需要的工作濃度，現(xiàn)配現(xiàn)用。

2）   腔腸素在溶液中的穩(wěn)定性比較低，號于正式實驗前才配制溶液（包括高濃度母液）。但若實際要求，必須保存母液，目前來說穩(wěn)定的溶劑是丙二醇，往內(nèi)加入少量L-抗壞血酸，β-巰基乙醇，DTT，DTE，或少量HCl能維持其還原態(tài)。不過，還原劑可能會減低氧化腔腸素（氧化為Coelenteramide）的動力學速率。也有可能破壞熒光素酶活性。而凍存在醇類溶劑中可能引起腔腸素沉淀，實際取決于溶液濃度。當然，可通過加熱50-60℃，使得沉淀重新溶解。必須確保無可見沉淀，或在實驗前（特別是活體動物實驗）離心去沉淀。

1.1    腔腸素母液制備

1.2    腔腸素工作液制備

二、  操作方法

2.1 體外生物發(fā)光

2.2 體內(nèi)動物成像

【注意】：腔腸素的注射劑量可能根據(jù)動物類型、品種、注射方式以及報告基因種類有所差異。加的注射劑量請自行摸索或參考文獻來做。

對于海腎熒光素酶報告基因系統(tǒng)，通過腹腔（IP）或靜脈注射（IV）按照25-100μg/只小鼠能得到良好結果。對于分泌型膜錨定熒光素酶（Gluc）報告基因系統(tǒng)，由于分泌型膜錨定熒光素酶代謝活性增加，相對來說需要更高量的腔腸素。文獻（Tannous BA. Gaussia luciferase reporter assay for monitoring of biological processes in culture and in vivo.Nat Protoc.2009;4(4):582-591.）提到，當用靜脈注射（IV）按照4mg/kg體重給藥能得到良好結果。

a）根據(jù)自身實驗室條件選擇適當方法麻醉動物，視情況決定是否去皮（通常黑色皮毛動物需去皮）。

b）根據(jù)實際情況往動物體內(nèi)注射相應劑量步驟1.2 配制好的腔腸素工作液。比如，對于海參熒光素酶報告基因系統(tǒng)，使用26-gauge針頭注射器尾靜脈注射100µl 2 mM (~1mg/ml)腔腸素工作液，然后立即對動物進行體內(nèi)成像檢測，以獲得峰值信號。

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— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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