凝膠染料 分子生物學(xué)
簡(jiǎn)要描述:
凝膠染料 分子生物學(xué) ,SYBR Green II是目前已知電泳凝膠中RNA檢測(cè)較靈敏的染料之一,在瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠中低檢到100pg RNA或ssDNA的單一條帶(使用254nm紫外反射光源照射,并用寶麗來667黑白膠片和SYBR濾光片拍照)
產(chǎn)品時(shí)間:2024-03-20
SYBR Green II RNA Gel Stain (10,000× in DMSO)
RNA凝膠染料
產(chǎn)品標(biāo)簽
SYBR Green II;GoldView;Acridine Orange 吖啶橙;GelRed; GelGreen;溴化乙錠(EB);SYBR Green I;
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格(元) |
SYBR Green II RNA Gel Stain (10,000× in DMSO) RNA凝膠染料 | MF0752-100UL | 100µl | 780 |
SYBR Green II RNA Gel Stain (10,000× in DMSO) RNA凝膠染料 | MF0752-500UL | 500µl | 2950 |
產(chǎn)品描述
SYBR Green II是目前已知電泳凝膠中RNA檢測(cè)較靈敏的染料之一,在瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠中低檢到100pg RNA或ssDNA的單一條帶(使用254nm紫外反射光源照射,并用寶麗來667黑白膠片和SYBR濾光片拍照)。即使用300nm透射光也能檢測(cè)到500pg RNA的單一條帶。SYBR Green II的靈敏度明顯強(qiáng)于溴化乙啶(EB)。標(biāo)準(zhǔn)瓊脂糖迷你膠EB低檢出1.5ng單鏈核酸的單一條帶(使用300nm透射光照射并用橙-紅明膠濾光片拍照)。
SYBR Green II在變性瓊脂糖/甲醛凝膠和聚丙烯酰胺/尿素凝膠中的檢測(cè)靈敏度有點(diǎn)降低,然而仍優(yōu)于EB。為了獲得大的檢測(cè)靈敏度,瓊脂糖/甲醛凝膠必須在EB染色前清洗數(shù)小時(shí)。相反,不做任何的清洗或脫色步驟,用SYBR Green II染色的瓊脂糖/甲醛凝膠或聚丙烯酰胺/尿素凝膠能檢測(cè)到1ng RNA單一條帶(254nm反射照明)和4ng RNA單一條帶(300nm透射照明)。SYBR Green II在RNA檢測(cè)具備這一靈敏度的特性歸因于幾個(gè)因素,包括*的熒光量子產(chǎn)量、結(jié)合能力和熒光增強(qiáng)。
本品為溶于DMSO 的10,000×的SYBR Green II RNA核酸染料,可用于:1)Northern Blot、起始位點(diǎn)作圖或cDNA制備前對(duì)RNA產(chǎn)物的小量分析;2)高分辨率變性梯度凝膠電泳(DGGE)后對(duì)5S rRNA遷移方式的觀察;3)單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP)中的DNA染色;4)PCR擴(kuò)增前對(duì)DNA染色。
注意事項(xiàng)
- 必須警告用戶注意,目前尚無關(guān)于SYBR Green II 對(duì)人體的致突變性或毒性的數(shù)據(jù)。由于該染料與核酸結(jié)合,應(yīng)當(dāng)被看作潛在誘變劑,使用時(shí)要小心謹(jǐn)慎。在處理DMSO儲(chǔ)存液時(shí)應(yīng)特別小心,因DMSO能促進(jìn)有機(jī)分子進(jìn)入組織。強(qiáng)烈建議處理DMO儲(chǔ)存液需戴雙層手套。和所有的核酸染料一樣,含SYBR Green II RNA核酸染料的溶液需先穿過活性炭再丟棄?;钚蕴恐蟊仨毞贌齺砥茐娜玖?。
- SYBR Green II可通過乙醇沉淀法從核酸中去除。異丙醇沉淀法去除效果稍差些。正丁醇萃取、氯萃防取和酚萃取法無法有效去除該染料。
- 先用EB染色的凝膠可接下來用SYBR Green II染色,根據(jù)電泳后染色(post-staining)的標(biāo)準(zhǔn)步驟操作。與直接用SYBR Green II染色相比較可能靈敏度有些降低。
- 不要在玻璃器皿中稀釋SYBR Green II儲(chǔ)存液,因其會(huì)結(jié)合到玻璃上。在聚丙烯器皿中稀釋儲(chǔ)存液。
- SYBR Green II不會(huì)干擾酶反應(yīng)。
- 當(dāng)用SYBR Green II染Northern或Southern Blot凝膠,建議在預(yù)雜交液和雜交液內(nèi)加入0.1%-0.3% SDS。
- 不建議用254nm紫外透射儀對(duì)凝膠拍照,因紫外光源的輪廓會(huì)出現(xiàn)在照片上。需要使用允許525nm光透過且排斥其他波長(zhǎng)光的濾光片。
- 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
- 光譜特征
SYBR Green II RNA核酸染料可用常見的紫外反射和透射激發(fā)光源,以及手持式紫外燈檢測(cè)。SYBR Green II的大激發(fā)波長(zhǎng)為497nm,但還有一個(gè)二級(jí)激發(fā)峰集中在254nm附近。與RNA結(jié)合的SYBR Green II的熒光發(fā)射集中在520nm。這些光譜特性讓SYBR Green II適用于多種凝膠檢測(cè)儀,從紫外反射(上紫外)和透射儀(下紫外)到氬離子激光器和水銀燈激發(fā)的凝膠掃描儀。
使用方法
一、使用前準(zhǔn)備工作
使用前將本品取出并回溫至室溫,使DMSO*解凍、溶液均一。于離心機(jī)上短暫離心確保所有溶液到管底。*次使用時(shí)可將本品分裝成多個(gè)小份后凍存,小份染料能更快溶解。
二、 染色方法
1.電泳后染色(后染,推薦)
2.電泳前染色(預(yù)染)
三、 觀察和凝膠成像
3.1 使用300nm紫外透射光或254nm紫外反射光(靈敏度更高)照射染色凝膠。
3.2 為了加靈敏度,建議使用黑白膠片,可用的SYBR Green照相濾光片(Thermo fisher, #S7569)拍照。許多其他的黃色或綠色明膠或玻璃紙濾光片也能用來拍照,但絕大多數(shù)可能會(huì)減低靈敏度。EB染色凝膠拍照用的橙-紅濾光片不適合于SYBR Green II染色凝膠。
3.3 用的SYBR Green照相濾光片(Thermo fisher, #S-7569)和Polaroid 667黑白膠片對(duì)凝膠進(jìn)行拍照。染色凝膠基本無背景熒光,當(dāng)檢測(cè)少量RNA,允許長(zhǎng)期膠片曝光。對(duì)于300nm透射,通常F-stop設(shè)置4.5時(shí)曝光1-2s足夠。對(duì)于254nm反射(特別是手持燈),大約需要曝光1-1.5min以得到大靈敏度。
相關(guān)產(chǎn)品
貨號(hào) | 名稱 | 規(guī)格 |
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MF0752-100UL | SYBR Green II RNA Gel Stain (10,000× in DMSO) RNA凝膠染料 | 100µl |
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MF0754-500UL | MKRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water) 核酸凝膠染料(效果同GelRed) | 500µl |
MF0755-500UL | MKGreen Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water) 核酸凝膠染料(效果同GelGreen) | 500µl |
MF0756-1G | Ethidium Bromide (EB) 溴化乙錠(EB,粉末) | 1g |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
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SYBR Green II RNA Gel Stain (10,000× in DMSO) RNA凝膠染料 分子生物學(xué)
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