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產(chǎn)品中心
ATCC農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞 表達(dá)分析

ATCC農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞 表達(dá)分析

簡(jiǎn)要描述:

ATCC農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞 表達(dá)分析表達(dá)分析 ATCC15834電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,特別適合大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化?;蛐蜑锳grobacterium rhizogenes pRi15834 (agropine type),經(jīng)pCAMBIA2301質(zhì)粒(卡那mei素抗性)檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>105 cfu/μg DNA。

產(chǎn)品時(shí)間:2024-03-14

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ATCCElectrocompetent Cell

農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品標(biāo)簽

ATCC;MSU440;Ar 1193;Ar A4K599;C58C1;Agrobacterium rhizogenes 發(fā)根農(nóng)桿菌;pCAMBIA2301;Streptomycin 鏈mei素;Rifampicin利fu平;


產(chǎn)品訂購(gòu):

貨號(hào)

產(chǎn)品名稱(chēng)

規(guī)格

價(jià)格(元)

MF2466-0500UL

ATCC Electrocompetent Cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

10×50μl

720

MF2466-2500UL

ATCC Electrocompetent Cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

50×50μl

3000





產(chǎn)品描述

發(fā)根農(nóng)桿菌(Agrobacterium rhizogenes)是根瘤菌科農(nóng)桿屬的一種革蘭氏陰性土壤細(xì)菌,能夠侵染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個(gè)別裸子植物。起關(guān)鍵作用的是其攜帶的Ri質(zhì)粒,含有負(fù)責(zé)發(fā)根自主性生長(zhǎng)和冠癭堿合成的基因。結(jié)構(gòu)上與Ti質(zhì)粒類(lèi)似,主要有致毒區(qū)(Vir),T-DNA區(qū)以及冠癭堿合成功能區(qū)等。

根據(jù)合成冠癭堿的不同,Ri質(zhì)粒分為4種類(lèi)型:1)甘露堿型;2)黃瓜堿型;3)農(nóng)桿堿型;4)米奇矛型。

發(fā)根農(nóng)桿菌菌株ATCC來(lái)源于American type culture collection (ATCC),為發(fā)根農(nóng)桿菌原始菌株。ATCC含pRi農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒,具有廣泛的宿主范圍(禾本科,豆科,煙草等),特別適合對(duì)zi杉醇,青蒿等藥用植物毛狀根的誘導(dǎo)。


我司提供ATCC電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,特別適合大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化?;蛐蜑?/span>Agrobacterium rhizogenes pRi (agropine type),經(jīng)pCAMBIA2301質(zhì)粒(卡那mei素抗性)檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>105 cfu/μg DNA。


產(chǎn)品包裝

組分編號(hào)

組分名稱(chēng)

貨號(hào)(規(guī)格)

MF2466-0500UL

MF2466-2500UL

MF2466-A

ATCC Electrocompetent Cell

10×50μl

550μl

MF2466-B

pCAMBIA2301 Control Vector (10ng/μl)

10μl

10μl



注意事項(xiàng)

  • 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-80,不可反復(fù)凍融和放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng),以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

  • 整個(gè)轉(zhuǎn)化操作,嚴(yán)格根據(jù)相應(yīng)溫度及無(wú)菌條件要求進(jìn)行。

3) 加入質(zhì)粒的體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10。質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染,會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)化效率急劇下降。質(zhì)粒增大一倍,轉(zhuǎn)化效率下降一個(gè)數(shù)量級(jí)。

  • 為確保高轉(zhuǎn)化效率,整個(gè)操作過(guò)程應(yīng)盡量輕柔,并保持低溫。

5) 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞中不可混入氣泡,轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳?yīng)減少終涂板用量。

6) 平板上克隆密度過(guò)大時(shí),由于營(yíng)養(yǎng)不足,克隆生長(zhǎng)變慢,菌落變小。為獲得大菌落,應(yīng)減少質(zhì)粒用量。

7) ATCC生長(zhǎng)緩慢,轉(zhuǎn)化質(zhì)粒后的ATCC涂布在含抗生素的平板上應(yīng)生長(zhǎng)72h。

8) 為了保證加的轉(zhuǎn)化效率,發(fā)根農(nóng)桿菌的培養(yǎng)建議使用TY培養(yǎng)基(配方見(jiàn)附表1)。

9) 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。


使用方法

  • 將0.1 cm電基杯和杯蓋從儲(chǔ)存液中拿出倒置于干凈吸水紙上5min,待其瀝干水分,正置5min,使乙醇充分揮發(fā)干凈,立即插入冰中,壓實(shí)冰面,電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋,冰中靜置5min使其充分降溫。


  • 取-80保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞插入冰中5min,待其*融化。

  • 往50μl感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入0.01~1μg(體積不大于6μl)質(zhì)粒DNA,用手拍打管底使其混勻,立即插入冰中。用槍輕輕吹打混勻感受態(tài)細(xì)胞-質(zhì)粒之后快速轉(zhuǎn)移到電基杯中,蓋上杯蓋,空管保留待用【注意:質(zhì)粒DNAhao用試劑盒抽提,且用雙蒸水溶解。由于感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率較高,*次使用hao做預(yù)試驗(yàn)確定加的質(zhì)粒用量】。

  • 啟動(dòng)電轉(zhuǎn)儀,設(shè)置參數(shù):C=25 μF,PC=200 ohm,V=2400 V(此參數(shù)參考Bio-rad,具體使用請(qǐng)參考電轉(zhuǎn)儀推薦步驟來(lái)操作),將電基杯從冰中取出,吸水紙吸干外表面水分,快速放入電轉(zhuǎn)槽中,啟動(dòng)電基,電基完成快速插入冰中。

  • 加入1ml無(wú)抗生素的TY并轉(zhuǎn)移到感受態(tài)空管中,于28振蕩培養(yǎng)2~3h。

6) 6,000rpm離心1min,留取 100ul左右上清,之后用槍輕輕吹打重懸菌體。之后加到含相應(yīng)抗生素的TY平板上,用無(wú)菌玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開(kāi)。室溫正置10 min,待液體被吸收后,倒置平板,28培養(yǎng)72h。


相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱(chēng)

規(guī)格

MF2306-0500UL

EHA101 Electrocompetent cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

10×50μl

MF2307-0500UL

EHA105 Electrocompetent cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

10×50μl

MF2308-0500UL

LBA4404 Electrocompetent cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

10×50μl

MF2309-0500UL

GV3101 Electrocompetent cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

10×50μl

MF2310-0500UL

AGL1 Electrocompetent cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

10×50μl

MF2301-1000UL

EHA101 Chemically Competent Cell 農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2302-1000UL

EHA105 Chemically Competent Cell 農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2303-1000UL

LBA4404 Chemically Competent Cell 農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2305-1000UL

AGL1 Chemically Competent Cell 農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2304-1000UL

GV3101 Chemically Competent Cell 農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2451-1000UL

MSU440 Chemically Competent Cell 農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2452-0500UL

MSU440 Electrocompetent Cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

10×50μl

MF2453-1000UL

C58C1 Chemically Competent Cell 農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2454-0500UL

C58C1 Electrocompetent Cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

10×50μl

MF2455-1000UL

K599 Chemically Competent Cell 農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2456-0500UL

K599 Electrocompetent Cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

10×50μl

MF2457-1000UL

Ar A4 Chemically Competent Cell 農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2458-0500UL

Ar A4  Electrocompetent Cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

10×50μl

MF2459-1000UL

Ar Qual Chemically Competent Cell 農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2460-0500UL

Ar Qual Electrocompetent Cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

10×50μl

MF2462-0500UL

Ar 1193 Electrocompetent Cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

10×50μl

MF2466-0500UL

ATCC Electrocompetent Cell 農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

10×50μl


附表1 固體和液體TY培養(yǎng)基配方

組分Component

TY(液體)/升

TY(固體)/升

胰蛋白胨 Tryptone

5g

5g

酵母提取物 Yeast extract

3g

3g

瓊脂 Agar

/

15g


補(bǔ)水到1L,121℃,20min高壓滅菌

補(bǔ)水到1L,121℃,20min高壓滅菌

氯化鈣 CaCl2

配制1M CaCl2水溶液,121℃,20min高壓滅菌。之后按照10ml/L加入上方滅菌的液體營(yíng)養(yǎng)液。

配制1M CaCl2水溶液,121℃,20min高壓滅菌。之后按照10ml/L加入上方滅菌的液體營(yíng)養(yǎng)液。


附表2 固體和液體YMB培養(yǎng)基配方

組分Component

YMB(液體)/升

YMB(固體)/升

酵母提取物 Yeast extract

1g

1g

MgSO4·7H2O

0.2g

0.2g

K2HPO4

0.5g

0.5g

NaCl

0.1g

0.1g

甘lu醇

10g

10g

瓊脂 Agar

/

15g


補(bǔ)水到1L,*溶解后,調(diào)pH至7.0,121℃,20min高壓滅菌

補(bǔ)水到1L,*溶解后,調(diào)pH至7.0,121℃,20min高壓滅菌


附表3常見(jiàn)發(fā)根農(nóng)桿菌對(duì)抗生素敏感性總表


附表4 ATCC菌株質(zhì)粒轉(zhuǎn)化篩選抗生素使用濃度

抗生素

配方

篩選培養(yǎng)基

母液

工作液

硫酸卡那mei素

去離子水溶解,0.22μm濾膜除菌

YMB 或 TY

100mg/ml

100μg/ml

壯觀mei素

去離子水溶解,0.22μm濾膜除菌

TY

50mg/ml

70μg/ml


— —Written/Edited by V. Shallan


上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品與實(shí)驗(yàn)服務(wù)工作,主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承以人為本,以誠(chéng)為信、合同守信"的經(jīng)營(yíng)理念。堅(jiān)持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。


ATCC農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞 表達(dá)分析

ATCC農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞 表達(dá)分析


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