BODIPY 665/676 脂質過氧化熒光探針

產(chǎn)品關鍵詞

BODIPY 665/676；C11 BODIPY 581/591；Lipid Peroxidation Sensor；脂質過氧化感受器；鐵死亡（Ferroptosis）；FeRhoNox-1 (Fe2+ indicator) 亞鐵離子熒光探針；

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

BODIPY 665/676是一種親脂性熒光探針，高親和力結合游離脂肪酸和甘油三酯，具有長波長的吸收波長（λex=665nm）和熒光發(fā)射波長（Em=676nm）^[1]。與常用的脂質過氧化探針C11 BODIPY 581/591（MX5211-1MG）相似，BODIPY 665/676容易被過氧化自由基氧化，一旦氧化，發(fā)射波長遷移到605nm（λex =580 nm）^[2-4]。BODIPY 665/676最重要的優(yōu)勢在于發(fā)射波長是676nm，與絕大部分的熒光素之間無交叉，從而能避免比如自熒光的干擾。BODIPY 665/676具熱穩(wěn)定和高度疏水性特征，從而不會擴散出脂滴。激發(fā)器642nm與吸收波長665nm接近，由此，在很低的探針濃度下就能得到強熒光信號^[5]。

產(chǎn)品特征

1） 同義名：(E,E)-3,5-bis-(4-phenyl-1,3-butadienyl)-4,4-difluoro-4-bora-3a,4a-diaza-s-indacene

-3,5-雙-(4-苯基-1,3-丁二烯基)-4,4-二氟-4-硼拉-3a,4a-二氮雜-s-二茚

2） 分子量：448.32

3） 外觀：藍色固體

4）激發(fā)波長：665nm

5）發(fā)射波長：676nm

保存與運輸方法

保存：-20oC避光干燥保存，收到貨至少12個月有效。

運輸：冰袋運輸。

注意事項

1） 整個染色過程中需注意避光。

2） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法（活細胞成像分析）

1. 染色工作液的準備

1.1 儲存液的制備：將低溫保存的BODIPY 665/676干粉從冰箱取出后置于室溫至少20min，低速離心后，加入高質量DMSO配制成適宜濃度的儲存液，比如：10mM儲存液（即：往5mg BODIPY 665/676加入1.1153ml DMSO，充分溶解后混勻即可），根據(jù)單次用量分裝，≤-20℃保存，盡量避免反復凍融。

2. 染色步驟

3. 圖像處理和分析

應用示例（來自文獻，僅做參考）

1） 為了測定脂質過氧化（Lipid Peroxidation），MDA-MB 231細胞加入BODIPY 665/676（5 μM）孵育30 min。用PBS清洗細胞兩次以去除多余的染料。用VariosKan酶標儀測定熒光值，結果以熒光強度（AU）來展示?！疚墨I來源】：Consoli V, Sorrenti V, Pittalà V, Greish K, D'Amico AG, Romeo G, Intagliata S, Salerno L, Vanella L. Heme Oxygenase Modulation Drives Ferroptosis in TNBC Cells. Int J Mol Sci. 2022 May 20;23(10):5709. doi: 10.3390/ijms23105709. PMID: 35628518; PMCID: PMC9143660.

Fig 1. (A) Fluorescence images of JC-1 staining after 8 h of treatment. (B,C) Evaluation of treatment effects on mitochondrial membrane potential and lipid ROS accumulation (* p < 0.05, ** p < 0.005, vs. CTRL; ^## p < 0.005, ^### p < 0.0005 vs. erastin). The results are expressed as means ± SEM.

2） 為了評估中性脂滴含量和脂質過氧化，細胞用BODIPY 665/676（1μg/ml）于37℃孵育30 min。孵育結束后，細胞用FACSCalibur流式細胞儀分析?！疚墨I來源：Canonico B, Cesarini E, Salucci S, Luchetti F, Falcieri E, Di Sario G, Palma F, Papa S. Defective Autophagy, Mitochondrial Clearance and Lipophagy in Niemann-Pick Type B Lymphocytes. PLoS One. 2016 Oct 31;11(10):e0165780. doi: 10.1371/journal.pone.0165780. PMID: 27798705; PMCID: PMC5087958.】

圖 2. 圖 6. 通過 BODIPY® 665/676 (BP) 評估細胞內(nèi)脂質含量和脂肪自噬。(A) 單共焦光學切片（約 0.8 μm 厚度），顯示來自對照、營養(yǎng)剝奪和雷帕霉素處理的 tWT 和 tNP 細胞的 LTG（綠色）和 BP（紅色）的疊加以及與明場 (BF) 的相對合并。插圖顯示脂滴與細胞外表面結合，可能是新從細胞中擠出的，或者就在外細胞膜下方，最有可能被細胞胞吐。條形：10μm；插圖為 5 μm。(B) 用于對照、營養(yǎng)剝奪和雷帕霉素施用的對照和病理細胞中 LTG 和 BP 的皮爾遜共定位系數(shù) (PCC)。皮爾遜系數(shù)源自三個wan全獨立的實驗，每個實驗超過 10 個字段對累積結果有貢獻。各值表示為PCC±SD；**與相應對照相比，P < 0.01。通過雙向方差分析確定細胞系之間的差異顯著（***P < 0.001）。

3）為了測定脂質氧化（lipid Peroxides），細胞用總內(nèi)皮細胞處理，之后用BODIPY 665/676（2μg/ml）于37℃孵育30 min。之后上流式，用FlowJo 10.0.0軟件進行數(shù)據(jù)分析?！疚墨I來源：Rodrigues, J., Wang, YF., Singh, A. et al. Estrogen enforces the integrity of blood vessels in the bone during pregnancy and menopause. Nat Cardiovasc Res 1, 918–932 (2022). h**ttps*://；doi.org/10.1038/s44161-022-00139-0】

參考文獻

1] Canonico B、Cesarini E、Salucci S、Luchetti F、Falcieri E、Di Sario G 等。(2016) Niemann-Pick B 型淋巴細胞中的自噬、線粒體清除和脂噬缺陷?！豆部茖W圖書館 ONE》11(10)：e0165780。[2] Meyer W、Schmidt J、Busche R、Jacob R、Naim HY。皮膚材料塑料樹脂嵌入部分中脂質的演示。J 顯微鏡。2009年；233：5-9。pmid:19196406 [3] Raudsepp P、Brüggemann DA、Andersen ML。使用親脂性熒光探針 BODIPY(665/676) 和共焦激光掃描顯微鏡檢測水包油乳液單滴中的自由基。自由基生物醫(yī)學。2014 年 5 月；70:233-40。doi：10.1016/j.freeradbiomed.2014.02.026。Epub 2014 年 3 月 12 日。PMID：24631488。[4] Raudsepp P、Brüggemann DA、Andersen ML。通過探針 (E,E)-3,5-雙(4-苯基-1,3-丁二烯基)-4,4-二氟-4-硼酸檢測到水包油乳液液滴之間自由基轉移的證據(jù)-3a,4a-二氮雜-s-indacene，BODIPY(665/676.)。農(nóng)業(yè)食品化學雜志。2014 年 12 月 24 日；62(51)：12428-35。DOI：10.1021/jf50440

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