SYBR 14 綠色熒光核酸細(xì)胞染色
簡(jiǎn)要描述:
SYBR 14 綠色熒光核酸細(xì)胞染色SYBR 14核酸染料(SYBR 14 Nucleic Acid Stain)通常用來(lái)監(jiān)測(cè)精子活力,通過(guò)聯(lián)合SYBR 14和碘化丙啶(PI)的雙染方式能評(píng)估精液中的活精子占比。
產(chǎn)品時(shí)間:2024-05-23
SYBR 14 Nucleic Acid Stain (5mM)
綠色熒光核酸染料
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格(元) |
SYBR 14 Nucleic Acid Stain (5mM) | MX4239-50UL | 50µl | 588 |
SYBR 14 Nucleic Acid Stain (5mM) | MX4239-100UL | 100µl | 948 |
產(chǎn)品描述
SYBR 14核酸染料(SYBR 14 Nucleic Acid Stain)通常用來(lái)監(jiān)測(cè)精子活力,通過(guò)聯(lián)合SYBR 14和碘化丙啶(PI)的雙染方式能評(píng)估精液中的活精子占比。SYBR 14是一種核酸染料,與DNA結(jié)合后的吸收波長(zhǎng)是488nm,發(fā)射波長(zhǎng)是518nm。SYBR 14將活精子的核染成明亮綠色,反之,PI僅將喪失膜完整性的無(wú)運(yùn)動(dòng)精子染成紅色?;?死精子的占比通過(guò)先用SYBR/PI染色,之后再用流式分析染料攝取的方法進(jìn)行判斷。
本品以DMSO儲(chǔ)存液形式提供,濃度為5mM。只需用合適的生理緩沖液稀釋到工作濃度進(jìn)行簡(jiǎn)單孵育即可,適用于哺乳動(dòng)物精液樣本。
保存與運(yùn)輸方法
保存:-20℃避光干燥保存,至少1年有效。
運(yùn)輸:冰袋運(yùn)輸。
注意事項(xiàng)
1) 再次凍存本品前務(wù)必?cái)Q緊蓋子,管子建議直立保存。
2) 目前沒(méi)數(shù)據(jù)表明該探針具致畸性或毒性。由于該探針與核酸結(jié)合,可能被當(dāng)作一種潛在的突變劑,需做適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)措施。由于DMSO能促進(jìn)有機(jī)分子進(jìn)入組織,此儲(chǔ)存液在使用的過(guò)程中務(wù)必妥善操作。根據(jù)當(dāng)?shù)氐恼邅?lái)處理使用本品后的廢液。
3) 熒光染料均存在淬滅問(wèn)題,請(qǐng)盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。
4) 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
染色流程
1. 工作液的準(zhǔn)備
1.1 初次使用,將低溫保存的SYBR 14(5mM)從冰箱取出,置于室溫或25℃溫育至少30min,使其充分融化。按照單次用量分裝后,置于≤-20℃避光干燥保存。
1.2 于正式使用前,用合適的生理緩沖液稀釋SYBR 14(5mM)到10-20µM的工作液。
2. 染色流程
以下染色流程僅用作基本參考。試劑濃度必須根據(jù)精液來(lái)源、精子密度以及樣本內(nèi)的其他材料來(lái)進(jìn)行優(yōu)化調(diào)整。
2.1 用含10% BSA的HEPES緩沖鹽溶液(10mM HEPES, 150mM NaCl,10% BSA,pH 7.4)稀釋樣本(比如:精液樣本)
2.2 取5µl步驟1.2新鮮制備的SYBR 14工作液,加入1ml稀釋樣本中。
2.3 37℃孵育5-10min。
2.4 用熒光顯微鏡(FITC濾片)或流式細(xì)胞儀(488nm激發(fā)器,530/30nm濾片)進(jìn)行樣本分析。
染色示例
文獻(xiàn)來(lái)源:Anna Dziekońska et al. Fluorescence Microscopy and Flow-Cytometry Assessment of Substructures in European Red Deer Epididymal Spermatozoa after Cryopreservation. Animals 2023, 13(6), 990
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>精子活力(Sperm Motility)
實(shí)驗(yàn)步驟j:用SYBR-14和碘化丙啶(PI)評(píng)估活力(質(zhì)膜完整性)。稀釋精子樣本(200µl)加入2µl SYBR-14(1mM)和2µl PI(2.4 μM in Tyrode’s salt solution),37℃避光孵育10min。分別觀察帶綠頭的精子(SYBR-14+/PI?,具完整膜結(jié)構(gòu)的活精子)和帶紅頭的精子(死精子)。
實(shí)驗(yàn)步驟k:為了評(píng)估質(zhì)膜完整性,精子用SYBR-14和碘化丙啶(PI)染色。稀釋樣本(500µl)用3µl SYBR-14(1mM)和3µl PI(2.4 μM in Tyrode’s salt solution)染色。帶綠色熒光的SYBR-14陽(yáng)性精子和PI陰性精子被分類為具完整膜結(jié)構(gòu)的活精子細(xì)胞。
染色圖片(流式):
Fig 1:(A) Sperm viability (SYBR+/PI?). (B) Cytogram of a SYBR-14/PI stain.
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