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產(chǎn)品中心
Caspase-8活性檢測(cè)試劑盒 細(xì)胞增殖

Caspase-8活性檢測(cè)試劑盒 細(xì)胞增殖

簡(jiǎn)要描述:

Caspase-8活性檢測(cè)試劑盒 細(xì)胞增殖Caspases(Cysteine-requiring Aspartate Proteases)是一個(gè)高度保守的半胱an酸蛋白酶家族,特異性識(shí)別底物中的天冬氨酸殘基,在介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的過程中發(fā)揮著非常重要的作用。

產(chǎn)品時(shí)間:2024-05-28

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Caspase-8 Activity Assay Kit (Fluorometric)

Caspase-8活性檢測(cè)試劑盒(熒光法)


產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品編號(hào)

規(guī)格

價(jià)格(元)

Caspase-8活性檢測(cè)試劑盒(熒光法)

MX3233-20T

20T

930

Caspase-8活性檢測(cè)試劑盒(熒光法)

MX3233-100T

100T

2980


產(chǎn)品描述

Caspases(Cysteine-requiring Aspartate Proteases)是一個(gè)高度保守的半胱an酸蛋白酶家族,特異性識(shí)別底物中的天冬氨酸殘基,在介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的過程中發(fā)揮著非常重要的作用。Caspases以潛在酶原的形式表達(dá),通過自發(fā)蛋白分解機(jī)制或經(jīng)其他蛋白酶(通常是其他caspases)加工處理的方式被活化。人caspases可細(xì)分為三大功能組:細(xì)胞因子活化(caspase-1,-4,-5和-13),凋亡啟動(dòng)(caspase-2,-8,-9和-10)和凋亡執(zhí)行(caspase-3,-6和-7)。

Caspase-8(Caspase 8),也稱為Mch5,MACH和FLICE,位于caspase級(jí)聯(lián)層次結(jié)構(gòu)的頂端,是“上游"成員或caspases的啟動(dòng)家族。以無活性酶原的形式存在細(xì)胞內(nèi),分子量55kDa。一旦募集到死亡受體胞漿結(jié)構(gòu)域(比如Fas),通過配體蛋白FADD,即被激活,形成一個(gè)由18kDa和12kDa亞基組成的二聚體,進(jìn)一步激活下游的caspases(-3,-6和-7),進(jìn)而切割關(guān)鍵的細(xì)胞底物,導(dǎo)致細(xì)胞凋亡性死亡。

Caspase-8活性檢測(cè)試劑盒(熒光法)(Caspase-8 Activity Assay Kit, Fluorometric or Caspase-8 Fluorometric Assay Kit)以偶聯(lián)上發(fā)色基團(tuán)AFC的caspase-8序列特異性的多肽為底物。當(dāng)?shù)孜锉籧aspase-8剪切后,發(fā)色基團(tuán)被釋放出來,進(jìn)而用熒光酶標(biāo)儀來測(cè)定其熒光強(qiáng)度(激發(fā)波長(zhǎng)=485nm,發(fā)射波長(zhǎng)=535nm)。通過計(jì)算RFU凋亡誘導(dǎo)組/RFU陰性對(duì)照組的比值來確定凋亡誘導(dǎo)組caspase-8的活化程度。

本品適用于培養(yǎng)細(xì)胞以及新鮮組織的caspase-8活性檢測(cè)。


產(chǎn)品包裝

編號(hào)

組分名稱

保存方法

貨號(hào)(規(guī)格)

MX3233-20T

MX3233-100T

MX3233-A

Lysis Buffer 裂解緩沖液

2-8℃

5ml

20ml

MX3233-B

2× Reaction Buffer 2×反應(yīng)緩沖液

2-8℃

2ml

10ml

MX3233-C

Caspase-8 Substrate Caspase-8底物

-20避光

6μl

30μl

MX3233-D

0.1M DTT

-20避光

60μl

250μl


保存與運(yùn)輸方法

保存:-20℃保存,1年有效。開盒后置Lysis Buffer和2× Reaction Buffer于2-8℃保存。Caspase-8 Substrate和0.1M DTT需要避光凍存。

運(yùn)輸:冰袋運(yùn)輸。


注意事項(xiàng)

1) Caspase-8 Substrate需避光保存和使用。

2) 某些凋亡誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)的凋亡可能通過caspase-8非依賴的方式進(jìn)行,此種情況使用本品檢測(cè)的caspase-8活性無明顯變化,則,需要考慮凋亡機(jī)制中的其他信號(hào)通路。

3) 起始細(xì)胞數(shù)量需達(dá)3~5×106個(gè)或新鮮組織量達(dá)50~100mg,以保證達(dá)到測(cè)定所需的100~200μg蛋白量。Caspase-8的活性與細(xì)胞裂解后的蛋白含量有關(guān),如測(cè)定的RFU值偏低,可通過適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間來操作。但如果測(cè)定的RFU值依然不高,則要通過增加細(xì)胞數(shù)量或組織量的方法來提高蛋白量。

4) 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。


使用方法

1需要的其他試劑和材料

儀器:低溫高速離心機(jī)、熒光酶標(biāo)儀、微量移液器、玻璃勻漿器(組織樣本)

耗材:1.5ml微量離心管、白色或黑色(不透明、平底)的96孔酶標(biāo)板

試劑:PBS、蛋白定量試劑(比如:Bradford法蛋白濃度測(cè)定試劑盒)、ddH2O


2試劑準(zhǔn)備

2.1 Lysis Buffer(含DTT

于實(shí)驗(yàn)前,按每50μl Lysis Buffer 加入0.5μl DTT的比例準(zhǔn)備足量的裂解工作液,置于4℃或冰上待用。

2.2 Reaction Buffer(含DTT

于使用前,按每50μl 2×Reaction Buffer 加入0.5μl DTT的比例準(zhǔn)備足量的反應(yīng)工作液。

2.3 Caspase-8 Substrate工作液

將Caspase-8 Substrate從冰箱內(nèi)取出,置于室溫(或25℃水?。┦蛊涑浞秩诨?,低速離心使其沉至管底。于使用前,按照19.5μl 2×Reaction Buffer 加入0.5μl Caspase-8 Substrate的比例準(zhǔn)備足量的Caspase-8 Substrate工作液。


3樣本準(zhǔn)備

3.1 細(xì)胞裂解

a)用合適方法誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,同時(shí)設(shè)立陰性對(duì)照組(不加誘導(dǎo)劑),收集3~5×106個(gè)細(xì)胞。

b)PBS洗滌細(xì)胞2次(2000rpm,離心5min),盡量吸盡PBS上清。

c)往離心的沉淀細(xì)胞中加入100μl預(yù)冷的Lysis Buffer(含DTT,吹打混勻。

d)置冰上裂解20~60min,其間渦旋振蕩3~4次,每次10s;或凍融2~3次。

e)4℃,10,000rpm離心1min。

f)小心吸取上清(含裂解釋放的蛋白質(zhì))轉(zhuǎn)移到新的EP管內(nèi),置于冰上待用。

g)取少量上清(1~2μl),用常規(guī)方法(Bradford法)測(cè)定蛋白濃度。

3.2 組織裂解

a)取50~100mg組織置于培養(yǎng)皿內(nèi),用手術(shù)剪剪碎成3mm×3mm左右的小塊,加入150~200μl預(yù)冷的Lysis Buffer(含DTT,用玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次,注意低溫操作。

b)將組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5ml預(yù)冷的離心管,10,000rpm,4℃離心5min。

c)小心吸取上清(含裂解釋放的蛋白質(zhì))轉(zhuǎn)移到新的EP管內(nèi),置于冰上待用。

d)取少量上清(1~2μl),用常規(guī)方法(Bradford法)測(cè)定蛋白濃度。

4Caspase-8活性檢測(cè)

 

相關(guān)產(chǎn)品

貨號(hào)

名稱

規(guī)格

MX3223-20T

Caspase-1活性檢測(cè)試劑盒(比色法)

20T

MX3224-20T

Caspase-2活性檢測(cè)試劑盒(比色法)

20T

MX3225-20T

Caspase-3活性檢測(cè)試劑盒(比色法)

20T

MX3226-20T

Caspase-4活性檢測(cè)試劑盒(比色法)

20T

MX3227-20T

Caspase-6活性檢測(cè)試劑盒(比色法)

20T

MX3228-20T

Caspase-8活性檢測(cè)試劑盒(比色法)

20T

MX3229-20T

Caspase-9活性檢測(cè)試劑盒(比色法)

20T

MX3230-20T

Caspase 2活性檢測(cè)試劑盒(熒光法)

20T

MX3231-20T

Caspase-3活性檢測(cè)試劑盒(熒光法)

20T

MX3232-20T

Caspase-6活性檢測(cè)試劑盒(熒光法)

20T

MX3233-20T

Caspase-8活性檢測(cè)試劑盒(熒光法)

20T

MX3234-20T

Caspase-9活性檢測(cè)試劑盒(熒光法)

20T

 


Caspase-8活性檢測(cè)試劑盒 細(xì)胞增殖Caspase-8活性檢測(cè)試劑盒 細(xì)胞增殖

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