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產(chǎn)品中心
農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 克隆與表達(dá)

農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 克隆與表達(dá)

簡要描述:

農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 克隆與表達(dá)EHA105菌株由EHA101菌株改造而來,染色體背景為C58,核基因含篩選標(biāo)簽—利fu平抗性基因rif,為了便于轉(zhuǎn)化操作,此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運功能的琥珀堿型Ti質(zhì)粒pEHA105(pTiBo542DT-DNA),此質(zhì)粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件 質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能雖被破壞,但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DN

產(chǎn)品時間:2024-06-25

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EHA105(pSoup) Chemically Competent Cell

農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

 


產(chǎn)品標(biāo)簽:

EHA105菌株;農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞;Rifampicin(Rif) 利fu平;Kanamycin(kan)卡那mei素;EHA101;LBA4404;GV3101;AGL1;植物轉(zhuǎn)基因研究;

 

產(chǎn)品訂購:更大包裝或產(chǎn)品技術(shù)問題,

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

價格(元)

MF2473-1000UL

EHA105(pSoup) Chemically Competent Cell農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

288

MF2473-5000UL

EHA105(pSoup) Chemically Competent Cell農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

50×100μl

1228

 

產(chǎn)品描述:

EHA105菌株由EHA101菌株改造而來,染色體背景為C58,核基因含篩選標(biāo)簽—利fu平抗性基因rif,為了便于轉(zhuǎn)化操作,此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運功能的琥珀堿型Ti質(zhì)粒pEHA105(pTiBo542DT-DNA),此質(zhì)粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件,pEHA105(pTiBo542DT-DNA)質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能雖被破壞,但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移)。在EHA105菌株中轉(zhuǎn)入help質(zhì)粒:pSoup,即得到:EHA105 (pSoup)菌株,可幫助pGreen,62SK,pGs2系列質(zhì)粒在農(nóng)桿菌中復(fù)制,同時賦予該菌株四環(huán)素(tetR)抗性,適用于水稻、煙草等植物的轉(zhuǎn)基因操作。

我司(懋康生物)提供的EHA105 (pSoup)化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,基因型為C58 (rifR) Ti pEHA105 (pTiBo542DT- DNA) Succinamopine (pSoup-tetR),經(jīng)pGs2質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>104 cfu/μg DNA。

 

產(chǎn)品組分:

組分編號

組分名稱

貨號(規(guī)格)

MF2473-1000UL

MF2473-5000UL

MF2473-A

EHA105(pSoup)Chemically Competent Cell

10×100μl

50×100μl

MF2473-B

pGs2 Control Vector (10ng/μl)

10μl

10μl

 

保存與運輸條件:

保存:-80℃保存,1年有效。

運輸:干冰運輸。

 

注意事項

1) 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-80℃,不可反復(fù)凍融和放置時間過長,以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

2) 整個轉(zhuǎn)化操作,嚴(yán)格根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件要求進(jìn)行。

3) 加入質(zhì)粒的體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10。質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染,會導(dǎo)致轉(zhuǎn)化效率急劇下降。質(zhì)粒增大一倍,轉(zhuǎn)化效率下降一個數(shù)量級。

4) 為確保轉(zhuǎn)化效率,整個操作過程應(yīng)盡量輕柔,并保持低溫。

5) 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳?yīng)減少最終涂板用量。

6) 平板上克隆密度過大時,由于營養(yǎng)不足,克隆生長變慢,菌落變小。為獲得大菌落,應(yīng)減少質(zhì)粒用量。

7) 培養(yǎng)基中加入利fu平的目的是防止雜菌生長、篩選農(nóng)桿菌;根據(jù)所用菌株抗性加入鏈mei素或慶大mei素可防止Ti質(zhì)粒丟失,但鏈mei素不利于農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)基因操作,一般培養(yǎng)農(nóng)桿菌時不考慮鏈mei素或慶大mei素,因Ti質(zhì)粒丟失的概率極低(基本可以忽略)

8) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


使用方法

1) 取-80℃保存的感受態(tài)細(xì)胞于室溫或手心片刻待其部分融化,達(dá)到冰水混合狀態(tài)時插入冰浴中使其完quan融化。

2) 往100μl感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入0.01~1μg(體積不大于10μl)質(zhì)粒DNA,用手撥da管底使其混勻,依次于冰上靜置5min,液氮5min,37℃水浴5min,冰浴5min。

【注意】次使用,建議做預(yù)實驗確定所加質(zhì)粒的用量。

3) 加入700μl無抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基,于28℃振蕩培養(yǎng)2-3h。

4) 6,000rpm離心1min,吸掉600ul上清,之后用槍輕輕吹打重懸菌體。之后加到含相應(yīng)抗生素的LB或YEB平板上,用無菌玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開。室溫正置10 min,待液體被吸收后,倒置平板,28℃培養(yǎng)2-3天。

【注意】:當(dāng)平板只含50μg/ml卡那mei素時,28℃培養(yǎng)48h即可;當(dāng)平板中同時加入50μg/ml卡那mei素和10μg/ml利fu平時,需28℃培養(yǎng)48-60h;當(dāng)平板中同時加入50μg/ml卡那mei素和20μg/ml利fu平時,需28℃培養(yǎng)60-72h;不建議使用超過20μg/ml的利fu平用于平板或液體培養(yǎng)。

5)目的克隆的液體培養(yǎng):

j小量搖菌:往15ml的圓底透氣試管中加入1ml含對應(yīng)抗生素的LB液體培養(yǎng)基,從新鮮培養(yǎng)的平板上挑1-2個單菌落接種,30℃,200rpm搖菌24-48h。

k大量搖菌:100ml透氣三角瓶內(nèi)加入少于20ml含對應(yīng)抗生素的LB液體培養(yǎng)基,取小搖菌液按2%比例接菌,30℃,200rpm搖菌24-48h。


相關(guān)產(chǎn)品【感受態(tài)細(xì)胞系列】

產(chǎn)品編號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

MF2301-1000UL

EHA101 Chemically Competent Cell農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2302-1000UL

EHA105 Chemically Competent Cell農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2303-1000UL

LBA4404 Chemically Competent Cell農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2304-1000UL

GV3101 Chemically Competent Cell農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2305-1000UL

AGL1 Chemically Competent Cell農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2467-1000UL

GV3101(pSoup) Chemically Competent Cell農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2469-1000UL

GV3101(pSoup-p19) Chemically Competent Cell農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2471-1000UL

GV3101(pJIC SA-rep) Chemically Competent Cell農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2473-1000UL

EHA105(pSoup) Chemically Competent Cell農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2475-1000UL

EHA105(pSoup-p19) Chemically Competent Cell農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2476-1000UL

AGL1(pSoup) Chemically Competent Cell農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl

MF2477-1000UL

AGL1 (pSoup-p19) Chemically Competent Cell農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

10×100μl


相關(guān)產(chǎn)品【抗生素系列】

產(chǎn)品編號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

MS0014-1G

Rifampicin, USP Grade利fu平

1g

MS0014-5G

Rifampicin, USP Grade  利fu平

5g

MS0016-5G

Spectinomycin Dihydrochloride Pentahydrate壯觀mei素二鹽suan鹽五水合物

5g

MS0016-25G

Spectinomycin Dihydrochloride Pentahydrate壯觀mei素二鹽suan鹽五水合物

25g

MS0017-5G

Carbenicillin, Disodium Salt羧芐青mei素二鈉鹽

5g

MS0017-25G

Carbenicillin, Disodium Salt羧芐青mei素二鈉鹽

25g

MS0019-10G

Kanamycin Sulfate硫酸卡那mei素

10g

MS0019-25G

Kanamycin Sulfate硫酸卡那mei素

25g

MS0025-1G

Gentamycin Sulfate Salt硫酸慶大mei素

1g

MS0023-25G

Streptomycin Sulfate, USP Grade硫酸鏈mei素

25g


附表1固體和液體LB培養(yǎng)基配方

組分Component

LB(液體)/升

LB(固體)/升

胰蛋白胨Tryptone

10g

10g

酵母提取物Yeast extract

5g

5g

氯化鈉NaCl

10g

10g

1N NaOH

調(diào)整pH至7.0

調(diào)整pH至7.0

瓊脂Agar

/

15g


附表2固體和液體YEB培養(yǎng)基配方

組分Component

YEB(液體)/升

YEB(固體)/升

胰蛋白胨Tryptone

5g

5g

酵母提取物Yeast extract

1g

1g

牛肉浸膏Beef Extract

5g

5g

蔗糖Sucrose

5g

5g

七水硫suan鎂MgSO4·7H2O

0.49g

0.49g

1N NaOH

調(diào)整pH至7.0

調(diào)整pH至7.0

瓊脂Agar

/

15g


附表3常見農(nóng)桿菌對抗生素敏感性總表

農(nóng)桿菌菌株

羧芐(carb)

鏈mei素(strep)

利fu平(rif)

慶大mei素(gent)

卡那mei素(kan)

EHA101

S

S

R

S

R

EHA105

S

S

R

S

S

LBA4404

S

R

R

S

S

GV3101

S

S

R

R

S

AGL1

R

S

R

S

S

【備注】:S代表敏感,R代表抗性。

 

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

 

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務(wù)工作,主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本,以誠為信、合同守信"的經(jīng)營理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。

農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 表達(dá)分析農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 表達(dá)分析


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