大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞表達(dá)分析
簡(jiǎn)要描述:
大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞表達(dá)分析EPI300菌株有一個(gè)突變的trfA基因,該基因表達(dá)出的蛋白產(chǎn)物可以促進(jìn)含有ori V復(fù)制子的質(zhì)粒的高拷貝擴(kuò)繁,誘導(dǎo)液(CopyCutter Induction Solution)可以誘導(dǎo)trfA基因的表達(dá)。
產(chǎn)品時(shí)間:2024-07-16
EPI300 Chemically Competent Cell
大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
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貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 價(jià)格(元) |
MF2297-1000UL | EPI300 Chemically Competent Cell大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×100μl | 429 |
MF2297-5000UL | EPI300 Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 50×100μl | 1799 |
產(chǎn)品組分:
組分編號(hào) | 組分名 | 貨號(hào)(規(guī)格) | |
MF2297-1000UL | MF2297-5000UL | ||
MF2297-A | EPI300Chemically Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
MF2297-B | Control Vector puC19,10pg/μl | 10μl | 10μl |
菌株描述
EPI300菌株有一個(gè)突變的trfA基因,該基因表達(dá)出的蛋白產(chǎn)物可以促進(jìn)含有ori V復(fù)制子的質(zhì)粒的高拷貝擴(kuò)繁,誘導(dǎo)液(CopyCutter Induction Solution)可以誘導(dǎo)trfA基因的表達(dá)。當(dāng)含有ori V復(fù)制子質(zhì)粒的EPI300細(xì)胞在LB/2YT或SOB培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí),trfA基因的表達(dá)被抑制,ori V復(fù)制子質(zhì)粒的拷貝數(shù)維持在很低的水平;當(dāng)在培養(yǎng)基中加入誘導(dǎo)液(CopyCutter Induction Solution),ori V復(fù)制子質(zhì)粒的拷貝數(shù)可維持在很高的水平,提高了質(zhì)粒產(chǎn)量。因此EPI300菌株可以降低ori V復(fù)制子質(zhì)粒的拷貝數(shù),特別適合于各種不穩(wěn)定 DNA 或毒性基因的克隆。
【更多特征】:
[mcrA,Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]基因型,使EPI300適合于甲基化DNA的有效克隆;
endA1的突變確保質(zhì)??寺〉母弋a(chǎn)量;recA1的突變確保大分子DNA插入的穩(wěn)定性;
lacZΔM15標(biāo)記的存在,使EPI300適用于藍(lán)白斑篩選;
rpsL賦予EPI300鏈mei素抗性。
EPI300菌株基因型:F – mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80dlacZ?M15 ?lacX74 recA1 endA1 araD139 ?(ara,leu)7697 galU galK λ – rpsL nupG trfA dhfr
產(chǎn)品描述
本品是大腸桿菌EPI300菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細(xì)胞,可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>3×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。
保存與運(yùn)輸條件:
保存:-80℃保存,六個(gè)月有效。
運(yùn)輸:干冰運(yùn)輸。
注意事項(xiàng)
1) 感受態(tài)細(xì)胞必須用干冰運(yùn)輸。感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)在-80℃保存,不可反復(fù)凍融且放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng),否則會(huì)減低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2) 在冰上融化感受態(tài)細(xì)胞。
3) 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí),需在相應(yīng)溫度及無(wú)菌條件下進(jìn)行。
4) 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。
5) 為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功,可保留部分連接反應(yīng)液以重新轉(zhuǎn)化,將損失降到zui低。
6) 產(chǎn)品包裝內(nèi)含載體pUC19 DNA(10pg/μl),供對(duì)照實(shí)驗(yàn)用。
7) 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在無(wú)菌條件的標(biāo)準(zhǔn)下進(jìn)行】
1) 從-80℃冰箱取出取感受態(tài)細(xì)胞,迅速置于冰浴中,5min后待菌塊融化,加入目的DNA(質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物),用手輕彈管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰浴靜置25min。
2) 42℃水浴熱激45s,迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,冰上靜置2min。此過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。
3) 向每個(gè)離心管中加700 μl無(wú)菌的2YT或LB培養(yǎng)基(不含抗生素),混勻后置于37℃ 搖床,200 rpm振蕩培養(yǎng)60min,目的使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá),使菌體復(fù)蘇。
4) 低速離心收菌(比如5000rpm,1min),留取100μl左右上清,用槍輕輕吹打重懸菌塊,之后加到含所選質(zhì)粒篩選抗生素的2YT或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無(wú)菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開(kāi),將平板置于室溫(或37℃)直至液體被吸收,倒置培養(yǎng),37℃培養(yǎng)過(guò)夜。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選,37℃培養(yǎng)至少15h。
【注意】:
a)涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多,可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板;反之,若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少,可取200-300 μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計(jì)的克隆較少,可通過(guò)離心(5,000 rpm,1min)后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。
b)新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干,可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。
c)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少,可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。
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名稱(chēng) | 規(guī)格 | |
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MF2014-5ML | CopyCutter Induction Solution誘導(dǎo)液 | 5ml |
附表1固體和液體LB培養(yǎng)基配方
組分Component | LB(液體)/升 | LB(固體)/升 |
胰蛋白胨Tryptone | 10g | 10g |
酵母提取物Yeast extract | 5g | 5g |
氯化鈉NaCl | 10g | 10g |
1N NaOH | 調(diào)整pH至7.0 | 調(diào)整pH至7.0 |
瓊脂Agar | / | 15g |
附表2固體和液體2-YT培養(yǎng)基配方
組分Component | 2YT(液體)/升 | 2YT(固體)/升 |
胰蛋白胨Tryptone | 16g | 16g |
酵母提取物Yeast extract | 10g | 10g |
NaCl | 5g | 5g |
1N NaOH | 調(diào)整pH至7.0 | 調(diào)整pH至7.0 |
瓊脂Agar | / | 15g |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品與實(shí)驗(yàn)服務(wù)工作,主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本,以誠(chéng)為信、合同守信"的經(jīng)營(yíng)理念。堅(jiān)持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞表達(dá)分析大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞表達(dá)分析