農(nóng)桿菌化學感受態(tài)細胞 表達分析
簡要描述:
農(nóng)桿菌化學感受態(tài)細胞 表達分析GV3101菌株的背景為C58型,核基因含利fu平抗性基因rif。為了便于轉(zhuǎn)化操作,此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運功能的胭脂堿型Ti質(zhì)粒pMP90(pTiC58DT-DNA),此質(zhì)粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件,pMP90(pTiC58DT-DNA)質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能雖被破壞,但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移)
產(chǎn)品時間:2024-08-12
GV3101(pJIC SA_Rep) Chemically Competent Cell
農(nóng)桿菌化學感受態(tài)細胞
產(chǎn)品標簽:
GV3101(pJIC SA_Rep)菌株;農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞;Rifampicin(Rif) 利fu平;Kanamycin(kan)卡那mei素;EHA105;LBA4404;GV3101;AGL1;植物轉(zhuǎn)基因研究;
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產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 價格(元) |
GV3101(pJIC SA_Rep) Chemically Competent Cell 農(nóng)桿菌化學感受態(tài)細胞 | MF2471-1000UL | 10×100μl | 288 |
MF2471-5000UL | 50×100μl | 1228 |
產(chǎn)品描述:
GV3101菌株的背景為C58型,核基因含利fu平抗性基因rif。為了便于轉(zhuǎn)化操作,此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運功能的胭脂堿型Ti質(zhì)粒pMP90(pTiC58DT-DNA),此質(zhì)粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件,pMP90(pTiC58DT-DNA)質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能雖被破壞,但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移)。pMP90(pTiC58DT-DNA)型Ti質(zhì)粒攜帶篩選標簽Gent,賦予GV3101菌株慶大mei素抗性。在GV3101菌株中轉(zhuǎn)入help質(zhì)粒:pJIC SA_Rep,即得到GV3101(pJIC SA_Rep)菌株,可協(xié)助
pgR106,pgR107,pGreen,pGs2系列質(zhì)粒在農(nóng)桿菌內(nèi)復制,同時賦予該菌株四環(huán)素(Tet)抗性。另外,來源于番茄叢矮病毒的p19蛋白,能抑制宿主對外源基因的RNA沉默效應,提高異源基因轉(zhuǎn)錄子的穩(wěn)定性,進而改善異源蛋白的表達。本菌株適用于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的轉(zhuǎn)基因操作。
我司(懋康生物)提供的GV3101(pJIC SA_Rep)化學感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作,基因型C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) (gentR) Nopaline (pJIC SA_Rep -tetR),經(jīng)pGs2質(zhì)粒(卡那mei素抗性)檢測轉(zhuǎn)化效率>104 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組分:
組分編號 | 組分名稱 | 貨號(規(guī)格) | |
MF2471-1000UL | MF24-5000UL | ||
MF2471-A | GV3101(pJIC SA_Rep)Chemically Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
MF2471-B | pGs2 Control Vector (10ng/μl) | 10μl | 10μl |
保存與運輸條件:
保存:-80℃保存,一年有效。
運輸:干冰運輸。
注意事項
1) 感受態(tài)細胞應保存在-80℃,不可反復凍融和放置時間過長,以免降低感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率。
2) 整個轉(zhuǎn)化操作,嚴格根據(jù)相應溫度及無菌條件要求進行。
3) 加入質(zhì)粒的體積不應大于感受態(tài)體積的1/10。質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機物污染,會導致轉(zhuǎn)化效率急劇下降。質(zhì)粒增大一倍,轉(zhuǎn)化效率下降一個數(shù)量級。
4) 為確保最高轉(zhuǎn)化效率,整個操作過程應盡量輕柔,并保持低溫。
5) 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳獪p少最終涂板用量。
6) 平板上克隆密度過大時,由于營養(yǎng)不足,克隆生長變慢,菌落變小。為獲得大菌落,應減少質(zhì)粒用量。
7) 利fu平濃度應≤25μg/ml,過高濃度不利于農(nóng)桿菌生長,會降低其生長速度和轉(zhuǎn)化效率。
8) 培養(yǎng)基中加入利fu平的目的是防止雜菌生長、篩選農(nóng)桿菌;根據(jù)所用菌株抗性加入鏈mei素或慶大mei素可防止Ti質(zhì)粒丟失,但鏈mei素不利于農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)基因操作,一般培養(yǎng)農(nóng)桿菌時不考慮鏈mei素或慶大mei素,因Ti質(zhì)粒丟失的概率極低(基本可以忽略)。
9) GV3101(pJIC SA_Rep)感受態(tài)細胞雖具有四環(huán)素抗性,但在轉(zhuǎn)入目標質(zhì)粒涂板篩選陽性克隆時,只需加入目標質(zhì)??剐缘目股?,不用加四環(huán)素。
10) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
1) 取-80℃保存的感受態(tài)細胞于室溫或手心片刻待其部分融化,達到冰水混合狀態(tài)時插入冰浴中使其完quan融化。
2) 往100μl感受態(tài)細胞懸液中加入0.01~1μg(體積不大于10μl)質(zhì)粒DNA(注意:轉(zhuǎn)化效率較高,第一次使用前建議做預實驗確定適宜的質(zhì)粒量),用手撥da管底使其混勻,依次于冰上靜置5min,液氮5min,37℃水浴5min,冰浴5min。
3) 加入700μl無抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基,于28℃振蕩培養(yǎng)2~3h。
4) 6,000rpm離心1min,留取100μl左右上清,之后用槍輕輕吹打重懸菌體。之后加到含相應抗生素(不含四環(huán)素抗性)的LB或YEB平板上,用無菌玻棒輕輕的將細胞均勻涂開。室溫正置10 min,待液體被吸收后,倒置平板,28℃培養(yǎng)2-3天。
【注意】:當平板只含50μg/ml卡那mei素時,28℃培養(yǎng)48h即可;當平板中同時加入50μg/ml卡那mei素和20μg/ml利fu平時,需28℃培養(yǎng)60h;若使用的平板含50μg/ml利fu平,需在28℃培養(yǎng)72-90h。
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MF3732-2UG | pGreenII 0800-Luc Plant Expression Vector植物表達載體 | 2μg |
MF3733-2UG | pGreenII 62-SK Plant Expression Vector植物表達載體 | 2μg |
MS0014-1G | Rifampicin, USP Grade利fu平 | 1g |
MS0019-10G | Kanamycin Sulfate硫酸卡那mei素 | 10g |
MS0020-25G | Tetracycline Hydrochloride, USP Grade鹽suan四環(huán)素 | 25g |
MS0023-25G | Streptomycin Sulfate, USP Grade硫suan鏈mei素 | 25g |
MX7401-500G | Agar, Gel Strength>1200 g/cm2瓊脂粉(植物組培級) | 500g |
MS0006-30ML | Plant Preservative Mixture (PPM)植物組培抗菌劑 | 30ml |
附表1固體和液體LB培養(yǎng)基配方
組分Component | LB(液體)/升 | LB(固體)/升 |
胰蛋白胨Tryptone | 10g | 10g |
酵母提取物Yeast extract | 5g | 5g |
氯化鈉NaCl | 10g | 10g |
1N NaOH | 調(diào)整pH至7.0 | 調(diào)整pH至7.0 |
瓊脂Agar | / | 15g |
附表2固體和液體YEB培養(yǎng)基配方
組分Component | YEB(液體)/升 | YEB(固體)/升 |
胰蛋白胨Tryptone | 5g | 5g |
酵母提取物Yeast extract | 1g | 1g |
牛肉浸膏Beef Extract | 5g | 5g |
蔗糖Sucrose | 5g | 5g |
七水硫suan鎂MgSO4·7H2O | 0.49g | 0.49g |
1N NaOH | 調(diào)整pH至7.0 | 調(diào)整pH至7.0 |
瓊脂Agar | / | 15g |
附表3常見農(nóng)桿菌對抗生素敏感性總表
農(nóng)桿菌菌株 | 羧芐(carb) | 鏈mei素(strep) | 利fu平(rif) | 慶大mei素(gent) | 卡那mei素(kan) |
EHA101 | S | S | R | S | R |
EHA105 | S | S | R | S | S |
LBA4404 | S | R | R | S | S |
GV3101 | S | S | R | R | S |
AGL1 | R | S | R | S | S |
【備注】:S代表敏感,R代表抗性。 |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術(shù)領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作,主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領域。 本公司秉承“以人為本,以誠為信、合同守信"的經(jīng)營理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
農(nóng)桿菌化學感受態(tài)細胞 表達分析農(nóng)桿菌化學感受態(tài)細胞 表達分析