BJ5183-AD-1 Chemically Competent Cell

大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品標(biāo)簽：

BJ5183-AD-1；BJ5183；pAdeasy-1；pAdeasy-2；腺病毒系統(tǒng)；卡那mei素；鏈mei素；

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產(chǎn)品組分：

菌株描述

BJ5183菌株是一種具較高重組活力的大腸桿菌菌株，提供了轉(zhuǎn)移載體和含腺病毒基因組載體之間發(fā)生重組事件必要的元件，是目前腺病毒系統(tǒng)zui常用的菌株之一。BJ5183菌株含recBC sbcBC雙重突變，賦予其較強(qiáng)的重組能力，有利于目的基因與腺病毒骨架質(zhì)粒的重組。另外，BJ5183菌株含endA突變（編碼核酸內(nèi)切酶），這一突變賦予recBC sbcBC突變菌株更高的雙鏈斷裂修復(fù)活性，也有利于重組DNA的穩(wěn)定和高純質(zhì)粒的提取。StrR賦予BJ5183菌株鏈mei素抗性。

BJ5183-AD-1菌株是攜帶腺病毒質(zhì)粒pAdeasy-1（E1/E2 deleted）的BJ5183菌株，pAdeasy-1孵育該菌株氨芐抗性（AmpR）。在病毒質(zhì)粒構(gòu)建時(shí)，只需轉(zhuǎn)入線性化目的質(zhì)粒即可，簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)步驟，提高了病毒質(zhì)粒重組概率。

BJ5183-AD-1菌株基因型：endA1sbcBCrecBCgalKmet thi-1bioThsdR (StrR) [pAdEasy-1 (AmpR)]

產(chǎn)品描述

本品是大腸桿菌BJ5183-AD-1菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。經(jīng)pCAMBIA2301載體檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>1×105 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

保存與運(yùn)輸條件：

保存：-80℃保存，六個(gè)月有效。

運(yùn)輸：干冰運(yùn)輸。

注意事項(xiàng)

1） 感受態(tài)細(xì)胞必須用干冰運(yùn)輸。感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)在-80℃保存（避免溫度波動(dòng)），不可反復(fù)凍融且放置時(shí)間過長(zhǎng)，否則會(huì)減低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

2） 最好在冰上緩慢融化感受態(tài)細(xì)胞。不可在冰上放置時(shí)間過長(zhǎng)，否則會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3） 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí)，需在相應(yīng)溫度及無(wú)菌條件下進(jìn)行。

4） 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。

5） 為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可保留部分連接反應(yīng)液以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到zui低。

6） 產(chǎn)品包裝內(nèi)含載體pCAMBIA2301 DNA(10 ng/μl)，供對(duì)照實(shí)驗(yàn)用。

7） BJ5183-AD-1菌株的質(zhì)粒產(chǎn)量不高。腺病毒構(gòu)建成功后，可選擇在其它大腸桿菌菌株擴(kuò)繁和純化質(zhì)粒。

8） BJ5183-AD-1感受態(tài)細(xì)胞對(duì)溫度敏感，需儲(chǔ)存在-80℃超低溫冰箱，避免溫度波動(dòng)，以免感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率降低。

9） 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無(wú)菌條件的標(biāo)準(zhǔn)下進(jìn)行】

1） 從-80℃冰箱取出取感受態(tài)細(xì)胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌塊融化，加入目的質(zhì)粒（含有目的基因并且是線性化），用手輕彈管底輕輕混勻（避免用槍吹打），冰浴靜置25min。

2） 42℃水浴熱激45s，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2min。此過程不要搖動(dòng)離心管。

3） 向每個(gè)離心管中加入700 μl無(wú)菌的2YT或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，200 rpm振蕩培養(yǎng)60min，目的使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。

4） 低速離心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之后加到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無(wú)菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，之后倒置放于37℃過夜培養(yǎng)。

【注意】：

a）涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可不用離心，直接取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，則通過離心（5,000 rpm，1min）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。

b）新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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