BL21-AI Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學感受態(tài)細胞

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產(chǎn)品標簽：

BL21 Star (DE3) pLysS；Rosetta (DE3)；BL21 (DE3)；表達感受態(tài)細胞；pET表達載體；IPTG誘導；非毒性蛋白表達；

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【好消息】：見我司整理的BL21系列表達感受態(tài)細胞常見問題。 

產(chǎn)品組分：

菌株描述

BL21-AI菌株來源于BL21菌株，是一種大腸桿菌B/r菌株（E. Coli B/r）。含有一個染色體整合的編碼T7 RNA聚合酶（T7 RNAP）的基因到araBAD操縱子的araB位點，通過操控araBAD啟動子來調(diào)節(jié)T7 RNA聚合酶的表達。此菌株已經(jīng)敲除araB基因。tetA基因賦予四環(huán)素抗性，允許用四環(huán)素來驗證菌株。

由于T7 RNAP基因位于araBAD操縱子的araB位點，因此，可通過糖類（L-阿拉伯糖和葡萄糖）來調(diào)節(jié)T7 RNA聚合酶的表達。在培養(yǎng)基內(nèi)加入L-阿拉伯糖，能夠誘導araBAD啟動子下游T7 RNA聚合酶表達，進而促進目的蛋白表達；而在培養(yǎng)基加入葡萄糖，能夠抑制araBAD啟動子下游T7 RNA聚合酶表達，進而抑制目的蛋白表達。BL21-AI菌株適用于任何以T7啟動子為基礎的表達載體，進行高水平的重組蛋白表達。由于T7 RNA聚合酶的表達水平能被高度調(diào)控，該菌株特別適用于表達對其他BL21菌株有毒或抑制生長的蛋白。

BL21-AI菌株缺乏lon蛋白酶和外膜蛋白酶OmpT的基因，這兩種酶的缺失能夠降低外源重組蛋白在菌體內(nèi)的降解，從而增加了蛋白表達量。最終，BL21-AI菌株表達所得的重組蛋白產(chǎn)量與其他BL21菌株相近。

BL21-AI菌株基因型：F-ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm araB::T7RNAP-tetA

需求條件

建議在以下幾個情況下選擇BL21-AI菌株來表達您的目的基因：

a）   正在使用T7啟動子為基礎的表達載體（高拷貝或低拷貝皆可）

b）   當使用其他BL21菌株發(fā)現(xiàn)生長抑制現(xiàn)象（比如毒性）

c）   正要表達一種已知的毒性蛋白

產(chǎn)品描述

本品是大腸桿菌BL21-AI菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細胞，可用于DNA的熱激轉(zhuǎn)化。特別適合任何以T7啟動子為基礎的表達載體系統(tǒng)，且要求嚴格調(diào)控和大量表達毒性蛋白的應用。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達108 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

保存與運輸條件：

保存：-80℃保存，六個月有效。

運輸：干冰運輸。

注意事項

1）   感受態(tài)細胞必須用干冰運輸。感受態(tài)細胞應在-80℃保存，不可反復凍融且放置時間過長，否則會減低感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率。

2）   最好在冰上融化感受態(tài)細胞。

3）   進行轉(zhuǎn)化操作時，需在相應溫度及無菌條件下進行。

4）   為防止轉(zhuǎn)化實驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到zui低。

5）   產(chǎn)品包裝內(nèi)含質(zhì)粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供對照實驗用。

6）   為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無菌條件的標準下進行】

1）  從-80℃冰箱取出取感受態(tài)細胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌塊融化，加入目的DNA，用手輕彈管底輕輕混勻，冰浴靜置25min。

2）   42℃熱激45s，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3min。此過程不要搖動離心管。

3）   向每個離心管中加700 μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養(yǎng)60min，目的使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

4）   低速離心收菌（比如4000rpm，2min），留取100μl左右上清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之后加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16h。

【注意】：

a）涂布用量可根據(jù)具體實驗調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可不用離心，直接取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，則通過離心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。

b）新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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