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總一氧化氮檢測(cè)試劑盒(顯色法)

總一氧化氮檢測(cè)試劑盒(顯色法)

簡(jiǎn)要描述:

總一氧化氮檢測(cè)試劑盒(顯色法) 由于本試劑盒使用的是NADPH依賴的硝酸鹽還原酶,高濃度的NADPH會(huì)干擾后續(xù)檢測(cè),因此,試劑盒使用乳酸脫氫酶(LDH)來(lái)清除NADPH,確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

產(chǎn)品時(shí)間:2021-07-12

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Total Nitric Oxide Colorimetric Assay Kit

總一氧化氮檢測(cè)試劑盒(顯色法)

 

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

價(jià)格(元)

Total Nitric Oxide Colorimetric Assay Kit

總一氧化氮檢測(cè)試劑盒(顯色法)

50T

969

200T

2989

產(chǎn)品描述

總一氧化氮檢測(cè)試劑盒(Total Nitric Oxide Colorimetric Assay Kit)利用兩步法測(cè)定總一氧化氮水平,一步先用硝酸鹽還原酶(Nitrate reductase)將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,第二步再用經(jīng)典的Griess reagent,對(duì)亞硝酸鹽進(jìn)行定量測(cè)定,從而推算出總一氧化氮含量。

由于本試劑盒使用的是NADPH依賴的硝酸鹽還原酶,高濃度的NADPH會(huì)干擾后續(xù)檢測(cè),因此,試劑盒使用乳酸脫氫酶(LDH)來(lái)清除NADPH,確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

本試劑盒以亞硝酸鈉為標(biāo)準(zhǔn)品,通過(guò)優(yōu)化檢測(cè)體系,檢測(cè)下限達(dá)2μM,且在2~80μM范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。本試劑盒不僅能檢測(cè)細(xì)胞、組織或培養(yǎng)液中的一氧化氮含量,還能檢測(cè)血清、血漿或尿液中的一氧化氮含量。

 

  • 當(dāng)檢測(cè)細(xì)胞或組織一氧化氮含量,不建議使用RIPA裂解液,因其可能在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生沉淀,影響測(cè)試。建議使用一氧化氮分析用裂解液(不含蛋白酶/磷酸酶抑制劑)(貨號(hào):MP1509-100ML)。也可自行選擇適當(dāng)方式制備組織或細(xì)胞樣品的裂解液,要考慮到自行選擇的方式是否存在干擾試劑盒內(nèi)酶反應(yīng)的可能。
  • 當(dāng)檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液內(nèi)一氧化氮含量,不可使用RPMI1640等含較高濃度硝酸鹽的培養(yǎng)液,否則會(huì)干擾檢測(cè)。
  • 所有檢測(cè)反應(yīng)需避光進(jìn)行。
  • 由于檢測(cè)過(guò)程存在還原反應(yīng),凡是影響還原反應(yīng)的試劑都需要避免,比如DTT或2-ME
  • 本試劑盒利用的是間接法測(cè)定總一氧化氮含量,如果只需粗略測(cè)定一氧化氮相對(duì)量,可選擇我司提供的一氧化氮檢測(cè)試劑盒(貨號(hào):MX4731-500T)。如果需要直接測(cè)定一氧化氮水平,比如測(cè)定細(xì)胞內(nèi)實(shí)際的一氧化氮水平,可選擇我司提供的DAF-FM DA一氧化氮熒光探針(貨號(hào):MX4702-100T)。
  • 本試劑盒對(duì)人體有害,請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù),避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
  • 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 

【注意事項(xiàng)】

  • 反應(yīng)必須避光進(jìn)行。當(dāng)使用96孔板進(jìn)行檢測(cè),可用鋁箔紙包裹96孔板進(jìn)行避光。
  • 樣品的用量上限為60μl。血清、血漿或組織勻漿液通常使用40μl足夠。樣品不足60μl,不同樣品之間的體積需要保持一致,體積不足的部分用制備或稀釋樣品所用的溶液補(bǔ)足。
  • 可同時(shí)設(shè)置加入200μl水或PBS的2~3個(gè)孔為陰性對(duì)照,這2~3個(gè)孔僅加入水或PBS,不在加入任何其他試劑。
  • 加入Griess reagent I后需輕輕混勻。
  • 每次混勻后,可以1000~3000g離心數(shù)秒,把液體沉淀至管底。同時(shí)需避免各檢測(cè)孔中產(chǎn)生氣泡,以免氣泡干擾檢測(cè)結(jié)果。

3.2 在540nm(或520~560nm)測(cè)定吸光度。需在30min內(nèi)測(cè)完,以防褪色降低靈敏度。

3.3 以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),吸光度OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,獲得橫縱坐標(biāo)之間的函數(shù)關(guān)系式。之后將樣品OD值代入公式來(lái)計(jì)總算一氧化氮濃度。

3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線示例見右圖,僅供參考。實(shí)際測(cè)定時(shí),由于反應(yīng)條件、試劑盒批次差異等因素,會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果與示例數(shù)據(jù)存在一定差異。

 

常見問(wèn)題

  • 檢測(cè)結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)曲線良好,但樣品的吸光度很低,和空白對(duì)照接近,什么原因?

回復(fù): 標(biāo)準(zhǔn)曲線良好說(shuō)明檢測(cè)方法和檢測(cè)試劑盒基本上沒有問(wèn)題,樣品吸光度低說(shuō)明樣品中一氧化氮含量很低??梢圆扇〉霓k法是:1)加大樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的使用量至60μl,其余試劑用量不變。2)把整個(gè)檢測(cè)體系每種試劑的用量加大50%,這樣可以使檢測(cè)靈敏度增加約50%。3)如果上述方法還不能解決問(wèn)題,可以考慮濃縮樣品,即一方面在收集樣品的時(shí)候盡量使一氧化氮的濃度保持得較高例如裂解細(xì)胞時(shí)采用較小體積的裂解液,另一方面可以考慮用真空干燥或真空冷凍干燥的方法濃縮樣品。

  • 檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn)每個(gè)樣品的吸光度都非常高,什么情況?

回復(fù):使用RPMI 1640培養(yǎng)液時(shí)會(huì)發(fā)生這種情況。因RPMI 1640培養(yǎng)液中含有高濃度的硝酸鹽從而會(huì)使樣品檢測(cè)出來(lái)的吸光度都非常高。其他含有高濃度硝酸鹽的試劑也會(huì)產(chǎn)生類似情況,影響氧化還原反應(yīng)的試劑也可能產(chǎn)生類似干擾。使用過(guò)程中避免使用RPMI 1640等可能導(dǎo)致干擾檢測(cè)的試劑即可。

 

 

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

 

 

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品與實(shí)驗(yàn)服務(wù)工作,主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承以人為本,以誠(chéng)為信、合同守信的經(jīng)營(yíng)理念。堅(jiān)持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。

 

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