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pH熒光探針

pH熒光探針

簡要描述:

pH熒光探針是一種細(xì)胞膜滲透性的熒光探針,用來測定相對的胞內(nèi)pH變化。是常用的比率型pH探針-BCECF(2',7'-Bis-(2-Carboxyethyl)-5-(and-6)- Carboxyfluorescein)的*替代物。

產(chǎn)品時間:2021-07-12

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BCFL AM (Superior replacement for BCECF AM)

pH熒光探針

 

產(chǎn)品關(guān)鍵詞

BCFL AM; BCECF, AM;Dual-excitation ratiometric pH indicator 雙激發(fā)光比率型pH熒光探針;SBFI AM ( Na+ Indicator);Fluo-8, AM; 

 

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品編號

規(guī)格

價格(元)

BCFL AM (Superior replacement for BCECF AM)

MX4552-1MG

1mg

2089

 

產(chǎn)品描述

BCFL AM是一種細(xì)胞膜滲透性的熒光探針,用來測定相對的胞內(nèi)pH變化。是常用的比率型pH探針-BCECF(2',7'-Bis-(2-Carboxyethyl)-5-(and-6)- Carboxyfluorescein)的*替代物。與BCECF不同(至少由三種異構(gòu)體構(gòu)成的一種復(fù)合物,不同異構(gòu)體之間的比率因批次而異),BCFL是單一異構(gòu)體,具有更好的的結(jié)果重復(fù)性。BCFL具有與BCECF相同的光譜反應(yīng)(單波長測定λex/λem=490/535nm;或比率測定λex/λem=505/ 535nm和λex/λem=430/535nm)(光譜特征見附錄I)。BCFL AM表現(xiàn)出pH依賴的雙激發(fā)性,pKa~7.0,以及一個激發(fā)交點(diǎn)(454nm)。BCFL AM的比率型成像使得胞內(nèi)pH測定基本不受幾種可變因素的影響,包括染料濃度、光徑、細(xì)胞泄露和光漂白率。

 

產(chǎn)品特性

1) 同義名:BCFL AM ester; BCFL Acetoxymethyl Ester;

2) 分子量:~600

3) 溶解性:溶于DMSO

4) Ex/Em503/528nm

 

注意事項(xiàng)

1熒光染料都存在淬滅問題,操作或保存過程中盡量避光,減緩熒光淬滅。

2)為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 

使用方法

A、試劑準(zhǔn)備

1. 10% Pluronic F-127母液配制【可選】

a)將1g Pluronic F-127(貨號:MS4301-1G)溶于10ml去離子水,配制成10%(w/v)母液。

b)溶解過程中于40~50℃內(nèi)加熱10% Pluronic F-127母液30min,使其*溶解。

c)10% Pluronic F-127母液室溫保存,高達(dá)6個月穩(wěn)定,不要凍存。

2. HHBS Buffer(貨號:MS3510-500ML)或其他生理緩沖液

3. 丙磺舒(貨號:MZ8471-1G)或水溶性丙磺舒(貨號:MZ8472-154MG【可選】

 

B、操作步驟

【注意】:以下實(shí)驗(yàn)步驟中用到非離子表面活性劑Pluronic F-127和有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑丙磺舒(Probenecid),這兩種試劑雖然都是非必需的,但強(qiáng)力推薦使用。

1. 制備BCFL AM母液:于實(shí)驗(yàn)前,將低溫保存的BCFL AM粉末(Mw:~600)置于室溫回溫至少20min。低速離心后加入高質(zhì)量無水DMSO配制成10~20mM母液。比如:1mg BCFL AM粉末加入166μl DMSO充分溶解,混勻后即得到10mM母液。多余的母液根據(jù)單次用量分裝,避光凍存,約3個月穩(wěn)定

2. 用HHBS或其他的生理緩沖液制備2×工作液(含10μM BCFL AM和0.08% Pluronic F-127),比如,在合適的管子內(nèi)混合6.4μl BCFL AM(10mM 儲存液)和51.2μl 10% Pluronic F-127。之后,添加HHBS或其他生理緩沖液直到總體積為6.4ml。

【注意】:對于大部分的細(xì)胞系,建議BCFL AM的工作濃度為4~5μM。Pluronic F-127的終濃度建議為0.02~0.04%。

3. 吸取100μl 2×工作液到含100μl 細(xì)胞培養(yǎng)基的培養(yǎng)孔內(nèi),混勻,使得BCFL AM的終濃度為5μMPluronic F-127的終濃度為0.04%。

4. 置于37℃孵育30~60min。之后置于室溫孵育30min。

5. 吸走200μl染色液,之后重新加入含1mM丙磺舒的HHBS Buffer或其他生理緩沖液。

6. 添加化合物到檢測孔內(nèi)。之后通過熒光檢測來進(jìn)行pH分析?!締尾ㄩL檢測:Ex/Em=490/535nm(cutoff=515nm);或比率測定Ex/Em=505/535nm和430/535nm(cutoff=515nm)】

 

相關(guān)產(chǎn)品

貨號

名稱

規(guī)格

MX4551-1MG

BCECF Acid, Cell Impermeant pH熒光探針

1mg

MX4501-1MG

BCECF AM, Cell Permeant pH熒光探針

1mg

MX4552-1MG

BCFL AM (Superior replacement for BCECF AM) pH熒光探針

1mg

MX4553-1MG

BCFL Acid (Superior replacement for BCECF Acid) pH熒光探針

1mg

MZ2157-5MG

Nigericin, Sodium Salt 尼日利亞菌素(鈉鹽)

5mg

MS0049-5MG

Valinomycin 纈氨霉素

5mg

 

 

附錄 BCFL探針pH依賴性的光譜特征。A)吸收光譜;B)發(fā)射光譜;C)激發(fā)光譜;圖A)表明BCFL在pH4.5-9.0范圍內(nèi)的吸收光譜往紅光遷移(450nm→505nm),且摩爾吸光系數(shù)增加到約90,000 cm-1M-1,反映了BCFL具pH敏感性的吸收特征。圖B)表明BCFL在生理pH6-8范圍內(nèi)的發(fā)射光譜。與BCECF相似,BCFL在生理范圍內(nèi)的發(fā)射波長為526nm。圖C)說明BCFL作為雙激發(fā)比率型pH指示劑,具有激發(fā)等消光點(diǎn)(430nm)。

 

 

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

 

 

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品與實(shí)驗(yàn)服務(wù)工作,主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承以人為本,以誠為信、合同守信的經(jīng)營理念。堅(jiān)持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。

pH熒光探針

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